24小时热门版块排行榜    

查看: 4462  |  回复: 9
本帖产生 1 个 MolEPI ,点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

loveskyzhou

铁虫 (正式写手)


[交流] TEV酶的纯化出问题了,求解??、

最近要春一批TEV酶用来切HIS标签,PROTOCOL中说的是过NI柱和Q柱纯,过的时候发现蛋白很容易沉(尤其是盐低的时候);最后Q柱的峰很难看  跑出电泳来发现杂带很多  而且我要的是44KD的蛋白   但在30KD左右却又一条更明显的带。。。。。会不会是只有我要的蛋白沉了???
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

核酸生物学实验经验 【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

» 抢金币啦!回帖就可以得到:

查看全部散金贴

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
西瓜(金币+5, MolEPI+1): 大牛辛苦了! 2011-08-27 00:59:34
TEV酶现在可以在实验室自己表达纯化和使用,不一定要买试剂试剂公司的,所以你要自己做这个酶,就先查一下这个质粒是怎么来的,前面有没有人纯化过这个质粒表达的TEV酶,八成是有的,要不然你也拿不到这个质粒,问问他们纯化的操作和结果,再与自己的比较,看看是哪个地方出问题。

大肠杆菌表达蛋白质如果出现包涵体就很麻烦,这时候要先看看上清液中有没有你想要的蛋白质,如果有,那就别做包涵体复性,费时费力还效率特低,宁可摇多一些菌取上清液也别做复性。对于折叠正确的酶来说,在高盐的时候容易变性(6M以上的尿素可以将肽链相互纠缠的包涵体溶解),而在低盐例如20mM Tris-HCl 时能保持良好的溶解状态,例如我的淀粉酶,所以假如你的TEV酶是包涵体用尿素溶解的,那么你就思考一下,看看上清液中存在多少,别碰包涵体了。

假如形成了包涵体,你试一下其它宿主,例如BL21,ROSSETA,Origami(这个是brightfuture01用过,我没用过)等等,很可能有一个宿主表达出来的就主要处于上清液了,我几年前表达过5个纤维素酶基因,都主要在上清液。如果还都是包涵体,那么可能就是表达量多的时候就容易形成包涵体,试一下非表达菌株,例如JM109、EPI100、DH5alpha,可能虽然表达量少,但上清液中有你要的蛋白质。
5楼2011-08-27 00:22:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 loveskyzhou 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0856材料专硕353求调剂 +4 NIFFFfff 2026-03-20 4/200 2026-03-22 09:49 by 2026paper
[考研] 286分人工智能专业请求调剂愿意跨考! +4 lemonzzn 2026-03-17 8/400 2026-03-21 22:49 by lemonzzn
[考研] 材料求调剂 +5 @taotao 2026-03-21 5/250 2026-03-21 20:55 by lbsjt
[考研] 化学工程321分求调剂 +18 大米饭! 2026-03-15 22/1100 2026-03-21 20:20 by HH领袖
[考研] 【考研调剂】化学专业 281分,一志愿四川大学,诚心求调剂 +11 吃吃吃才有意义 2026-03-19 11/550 2026-03-21 18:23 by 学员8dgXkO
[考研] 298求调剂 +4 上岸6666@ 2026-03-20 4/200 2026-03-21 17:14 by 学员8dgXkO
[考研] 268求调剂 +9 简单点0 2026-03-17 9/450 2026-03-21 15:37 by lature00
[考研] 316求调剂 +6 梁茜雯 2026-03-19 6/300 2026-03-21 06:32 by Ecowxq666!
[考研] 307求调剂 +3 wyyyqx 2026-03-17 3/150 2026-03-21 03:20 by JourneyLucky
[考研] 324分 085600材料化工求调剂 +4 llllkkkhh 2026-03-18 4/200 2026-03-21 01:24 by JourneyLucky
[考研] 一志愿华中科技大学,080502,354分求调剂 +5 守候夕阳CF 2026-03-18 5/250 2026-03-21 01:06 by JourneyLucky
[考研] 261求B区调剂,科研经历丰富 +3 牛奶很忙 2026-03-20 4/200 2026-03-20 19:34 by JourneyLucky
[考研] 086500 325 求调剂 +3 领带小熊 2026-03-19 3/150 2026-03-20 18:38 by 尽舜尧1
[考研] 环境工程调剂 +9 大可digkids 2026-03-16 9/450 2026-03-20 17:38 by 醉在风里
[考研] 08工学调剂 +5 用户573181 2026-03-20 5/250 2026-03-20 15:47 by xia_2003
[考研] 081700化工学硕调剂 +3 【1】 2026-03-16 3/150 2026-03-19 23:40 by edmund7
[考研] 085600材料与化工调剂 324分 +10 llllkkkhh 2026-03-18 12/600 2026-03-19 14:33 by llllkkkhh
[考研] 材料考研调剂 +3 xwt。 2026-03-19 3/150 2026-03-19 11:22 by w沐阳w
[考研] 301求调剂 +4 A_JiXing 2026-03-16 4/200 2026-03-17 17:32 by ruiyingmiao
[考研] 070300化学学硕求调剂 +6 太想进步了0608 2026-03-16 6/300 2026-03-16 16:13 by kykm678
信息提示
请填处理意见