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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » TEV酶的纯化出问题了，求解？？、
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loveskyzhou

铁虫 (正式写手)

[交流] TEV酶的纯化出问题了，求解？？、

最近要春一批TEV酶用来切HIS标签，PROTOCOL中说的是过NI柱和Q柱纯，过的时候发现蛋白很容易沉（尤其是盐低的时候）；最后Q柱的峰很难看  跑出电泳来发现杂带很多  而且我要的是44KD的蛋白   但在30KD左右却又一条更明显的带。。。。。会不会是只有我要的蛋白沉了？？？
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1楼 2011-08-26 09:26:42
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florence2011

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★
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西瓜(金币+3): 鼓励分享经验 2011-08-28 16:52:17
用大肠杆菌的表达体系就可以在上清表达，tev酶切HIS tag 蛋白不用要求那么高的纯度，直接通过Ni柱纯化就可以用于酶切。我试过，酶切效率挺好的。
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8楼2011-08-28 16:18:18
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ganchao1776

至尊木虫 (职业作家)
★ ★ ★ ★
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loveskyzhou(金币+1): 2011-08-26 10:44:36
西瓜(金币+3): good 2011-08-26 17:52:55
盐低的时候不只是会沉淀吧，还会自己切自己的；你只能上柱的时候用尽可能高的盐浓度了，或都换其它比较简单的纯化方法，比如多次硫酸铵沉淀，反正只是工具酶，要求也不是非常的高

[ Last edited by ganchao1776 on 2011-8-26 at 12:10 ]
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2楼2011-08-26 10:24:49
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loveskyzhou

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ganchao1776 at 2011-08-26 10:24:49:
盐低，浓度高的时候不只是会沉淀吧，还会自己切自己的；你只能上柱的时候用尽可能高的盐浓度了，或都换其它比较简单的纯化方法，比如多次硫酸铵沉淀，反正只是工具酶，要求也不是非常的高

自己切自己啊。。。我开始也这么想来着 但在过完NI柱后跑的蛋白就有30KD的了，会不会转化有问题  或者质粒退化了
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3楼2011-08-26 10:44:22
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ganchao1776

至尊木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by loveskyzhou at 2011-08-26 10:44:22:
自己切自己啊。。。我开始也这么想来着 但在过完NI柱后跑的蛋白就有30KD的了，会不会转化有问题  或者质粒退化了

90%以上不会是质粒的问，只跟表达后的处理有关
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4楼2011-08-26 12:09:53
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