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mengxibio

新虫 (小有名气)

[交流] 做克隆出了很诡异的问题 已有9人参与

在做克隆,向感受态细胞导入载体出问题了。
向感受态细胞导入载体(上有抗amp位点,以及蓝白斑的位点)
结果,negative(纯的感受态细胞,没有导入载体)上出现大量蓝斑,而且其他几板普遍出现大量蓝斑,白斑几乎没有
之后我做菌落pcr,证明包括negative和其他几板上的蓝斑菌的确没有导入载体

问题是什么,操作上绝没有问题,我和另外一个人先后做了两遍,同样的结果

现在就怀疑是感受态细胞的问题,是一个师兄自己做的。但是这样的感受态细胞也太可怕了吧,不包括载体(已经用引物,做pcr证明),但是却含有抗amp基因,含有蓝白斑所需的基因

大家认为什么原因呢,排除操作上的原因
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haoziying

至尊木虫 (职业作家)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
可能是T载体自连的原因。

再转化时用感受态细胞不加质粒做空白对照试试。看看感受态如何。

建议你自己做感受态细胞,转化效率自己能掌握。
11楼2011-08-09 18:26:42
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