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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 提不出质粒，不知道出了什么问题，求助……
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vickie20

铜虫 (小有名气)

[求助] 提不出质粒，不知道出了什么问题，求助……

我用的大肠杆菌BM25.8提质粒，菌已经保存一年多了，我用保存的菌液划板，然后挑取单菌落接种到液体LB里摇过夜，再用这些长好的菌液提，用的是biomiga的试剂盒，按照说明书的步骤来的，操作是没什么问题，这些质粒空载体大小有3589bp，目的基因已经测序，800-1000bp，提好后跑胶，用的5000bp的Marker，提出来的东西都比5000大，这些都不是质粒吧？做了十来天了都一直都没提好，不知道出了什么问题，原来看了好多帖子，变性时间啊，温和混匀啊，这些我都小心操作了，但是都提不出来，不知道哪里出问题了，求各位帮我分析下，哪里出差错了。附上其中一张电泳图。
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1楼 2011-08-04 15:47:08
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vickie20

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by susizheng at 2011-08-04 16:06:22:
有可能是质粒的，电泳没跑好，Maker都有弥散了，因为质粒是环状，比线状跑得慢，所以偏大是正常的。

不是说线性的最慢其他结构的快吗？一般来说不是有两条到三条带吗？我这个貌似每个泳道都只有一条
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3楼2011-08-04 17:05:12
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-08-04 16:36:24
vickie20(金币+5): 2011-08-04 17:11:53
有可能是质粒的，电泳没跑好，Maker都有弥散了，因为质粒是环状，比线状跑得慢，所以偏大是正常的。
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Thank-you，so-blue.
2楼2011-08-04 16:06:22
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
引用回帖:
3楼: Originally posted by vickie20 at 2011-08-04 17:05:12:
不是说线性的最慢其他结构的快吗？一般来说不是有两条到三条带吗？我这个貌似每个泳道都只有一条

不好意思，口误了，环状是跑得比线状快，应该是有可能是复制中间体，及开环的形式曾在，跑得比线状慢。
建议可以找个合适的酶切位点酶切后和未酶切的质粒作个对照跑电泳，再看看。
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Thank-you，so-blue.
4楼2011-08-04 17:27:53
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longage.gene

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by susizheng at 2011-08-04 16:06:22:
有可能是质粒的，电泳没跑好，Maker都有弥散了，因为质粒是环状，比线状跑得慢，所以偏大是正常的。

一般来说环状更快！
楼主最好酶切试试看。楼主是含有质粒的菌保存了一年？你确定保存时没错？保存后check了没？
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5楼2011-08-04 17:28:52
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