应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 存档旧帖 » 合成基因没有检测到酶活？？？
121/2返回列表12下一页
查看: 1813  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

794378428

银虫 (小有名气)

[求助] 合成基因没有检测到酶活？？？

公司合成了一个质粒，在大肠杆菌BL21中表达，经IPTG诱导后，离心得到菌体，破碎细胞，纯化，经过SDS-PAGE能看到目的蛋白的条带，但是没有检测到酶活。不知道大家有没有遇到过这种情况，是哪个环节上可能出现了问题呢，困惑很久了，请大家提提建议
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-07-03 21:28:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

794378428

银虫 (小有名气)
dddddddd
回复此楼
2楼2011-07-03 21:29:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gwbk

木虫 (正式写手)

我也合成了几条基因，￥3，生工，好贵啊，希望不会出现你这种情况。
赞一下 回复此楼
3楼2011-07-03 22:24:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

794378428

银虫 (小有名气)
对啊，我那个花了快3000大洋，不知道是什么情况，纠结中
赞一下 回复此楼
4楼2011-07-04 11:12:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jiangyhai

金虫 (著名写手)
★ ★
dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-07-04 18:02:20
原核表达的蛋白很多是不具有活性的。不知道你的蛋白是可溶还是包涵体表达？如果是包涵体的话肯定是没有活性的。
赞一下(1人) 回复此楼
静心做事。
5楼2011-07-04 11:40:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

794378428

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by jiangyhai at 2011-07-04 11:40:18:
原核表达的蛋白很多是不具有活性的。不知道你的蛋白是可溶还是包涵体表达？如果是包涵体的话肯定是没有活性的。

不是包涵体
回复此楼
6楼2011-07-04 12:42:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

794378428

银虫 (小有名气)
ddddddddddd
回复此楼
7楼2011-07-04 14:40:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

足下客

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+5): good 2011-07-04 18:02:31
794378428(金币+2): 2011-07-05 08:21:44
以前看同学做蛋白表达，经常出现这种问题。
你确信构建的质粒上插入的基因片段与原始基因序列相比，没有出现碱基突变或缺失、插入的情况吗？
如果在基因层面上没有错误的话，应该就是测酶活环节出现了问题。有些蛋白表达需要加入一些特殊的金属离子，这个你要仔细查一下。之前我有个同学测了半年的酶活都没有结果，最后往里面加了种离子就可以了。
看一下这个酶的底物，有没有什么特殊性。
赞一下(2人) 回复此楼
8楼2011-07-04 17:01:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

794378428

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 足下客 at 2011-07-04 17:01:22:
以前看同学做蛋白表达，经常出现这种问题。
你确信构建的质粒上插入的基因片段与原始基因序列相比，没有出现碱基突变或缺失、插入的情况吗？
如果在基因层面上没有错误的话，应该就是测酶活环节出现了问题。有些 ...

质粒是老板设计的，这个我不清楚。呵呵，金属离子、ph、底物浓度等条件我都是参考一篇最近外文文献上的做法，都考虑到了。现在不知道问题到底出在哪里呢？
赞一下 回复此楼
9楼2011-07-05 08:23:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

libra1982

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

794378428(金币+1): 2011-07-05 10:34:04
794378428(金币+1): 2011-07-06 10:26:20
794378428(金币+1): 2011-07-06 13:19:52
引用回帖:
Originally posted by 794378428 at 2011-07-05 08:23:59:
质粒是老板设计的，这个我不清楚。呵呵，金属离子、ph、底物浓度等条件我都是参考一篇最近外文文献上的做法，都考虑到了。现在不知道问题到底出在哪里呢？

老板设计的啊？你们老板倒是很亲力亲为。这个最好先看下基因，包括接头等地方有没有错误，不然都白折腾了。
赞一下 回复此楼
10楼2011-07-05 10:31:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 794378428 的主题更新
121/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 今天放榜吗？ +12 布布和一二 2026-08-19 12/600 2026-08-19 13:45 by gloomy6159
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +8 ziyangfang 2026-08-19 9/450 2026-08-19 13:08 by blacksandy
[基金申请] 今天基金会出结果吗？20260819 +8 kkkl_v 2026-08-19 8/400 2026-08-19 12:34 by Vivilian
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +52 医学老男孩 2026-08-13 115/5750 2026-08-19 12:09 by 医学老男孩
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +8 启萌科技 2026-08-12 30/1500 2026-08-19 10:22 by 启萌科技
[基金申请] 快农历七夕节了，轻松一下，男人悄悄话，女施主请不要进来。 +6 Tide man 2026-08-14 7/350 2026-08-19 09:56 by ZJTJZ
[基金申请] 结合人工智能，周易传统文化，filecode打分制来了，3分以上希望很大。 +4 Tide man 2026-08-12 5/250 2026-08-19 07:41 by 201120518022
[基金申请] 重要消息，中午系统在维护 +10 yuleib84 2026-08-18 11/550 2026-08-19 07:30 by 羽毛枫f
[基金申请] 明天放榜？ +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +14 archvillain 2026-08-15 26/1300 2026-08-18 13:37 by phantomgost
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜？ +13 Ldrop2023 2026-08-13 16/800 2026-08-18 12:25 by 淀粉搬运工
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +6 angus9576 2026-08-17 11/550 2026-08-17 23:57 by angus9576
[基金申请] 今天系统多次维护，明天很可能放榜！ +8 zju2000 2026-08-16 9/450 2026-08-17 12:20 by lmz0216
[精细化工] 招聘 金属平磨液，抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 各位道友，我要去昆明玩几天，回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 重要来源：本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] Filecode 又变了，巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭