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银虫 (小有名气)

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[求助] 合成基因没有检测到酶活？？？

公司合成了一个质粒，在大肠杆菌BL21中表达，经IPTG诱导后，离心得到菌体，破碎细胞，纯化，经过SDS-PAGE能看到目的蛋白的条带，但是没有检测到酶活。不知道大家有没有遇到过这种情况，是哪个环节上可能出现了问题呢，困惑很久了，请大家提提建议

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1楼2011-07-03 21:28:45

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银虫 (小有名气)

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引用回帖:

Originally posted by 足下客 at 2011-07-04 17:01:22:
以前看同学做蛋白表达，经常出现这种问题。
你确信构建的质粒上插入的基因片段与原始基因序列相比，没有出现碱基突变或缺失、插入的情况吗？
如果在基因层面上没有错误的话，应该就是测酶活环节出现了问题。有些 ...

质粒是老板设计的，这个我不清楚。呵呵，金属离子、ph、底物浓度等条件我都是参考一篇最近外文文献上的做法，都考虑到了。现在不知道问题到底出在哪里呢？