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银虫 (小有名气)

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[求助] 合成基因没有检测到酶活？？？

公司合成了一个质粒，在大肠杆菌BL21中表达，经IPTG诱导后，离心得到菌体，破碎细胞，纯化，经过SDS-PAGE能看到目的蛋白的条带，但是没有检测到酶活。不知道大家有没有遇到过这种情况，是哪个环节上可能出现了问题呢，困惑很久了，请大家提提建议

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1楼2011-07-03 21:28:45

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足下客

木虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+5): good 2011-07-04 18:02:31
794378428(金币+2): 2011-07-05 08:21:44

以前看同学做蛋白表达，经常出现这种问题。
你确信构建的质粒上插入的基因片段与原始基因序列相比，没有出现碱基突变或缺失、插入的情况吗？
如果在基因层面上没有错误的话，应该就是测酶活环节出现了问题。有些蛋白表达需要加入一些特殊的金属离子，这个你要仔细查一下。之前我有个同学测了半年的酶活都没有结果，最后往里面加了种离子就可以了。
看一下这个酶的底物，有没有什么特殊性。