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scelab荣誉版主 (文坛精英)
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[求助]
提质粒浓度太小，条带不亮，有图求真相
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RT 之前一切都正常，现在无法重现  1 ml菌液，提完质粒50ul定容，上样2ul。如图 曾经试过多次转接；质粒重新转化新的DH5a；OD=1时添加氯霉素等方法，仍然很淡。  难道原因是摇床和LB？  求真相   |
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 【分子生物】EPI帖 |
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2楼2011-07-03 14:56:18
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【答案】应助回帖
scelab(金币+6): :arm: 2011-07-03 15:05:47
1949stone(EPI+1): epi 2011-07-03 18:09:26
scelab(金币+2): 把钱发光~ 2011-07-04 10:43:15
1949stone(EPI+1): epi 2011-07-03 18:09:26
scelab(金币+2): 把钱发光~ 2011-07-04 10:43:15
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你这图照反了吧？ 这不是有条带呢吗？有就可以说明问题呀，关键看你是否要进行下游操作了，如果单单看一下大小，那完全可以了，不过可以看出来你这是手提的质粒，不然底下怎么那么多的RNA呢？以后可以提完质粒之后加一点RNA酶，放置十几分钟再点样。。。 为什么不用试剂盒提呢？你这手提产量太低了。。。一般来说手提杂质虽然多，可是量很大的。。。 你是做什么实验呢？目的是。。。？ |
3楼2011-07-03 14:59:24
scelab
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4楼2011-07-03 15:02:37
scelab
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5楼2011-07-03 15:05:09
scelab
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8楼2011-07-03 15:32:03
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dhd997(金币+5, EPI+1): 2011-07-03 18:08:40
1949stone(EPI-1): 很谦虚 2011-07-03 21:04:17
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1949stone(EPI-1): 很谦虚 2011-07-03 21:04:17
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那是不是抗生素失效了？没有选择压力的时候质粒不扩增的。似乎隐约是有两条带，还隔得挺远的，莫非是两个质粒？DH5a用来表达？ 如果用4毫升菌液，我觉得质粒的量应该会增多的，溶液123容量看着变化就行了。不增加用量也行，关键是看溶液2能不能使得菌液澄清，澄清了就表示足够保证效果了。 你的质粒那么小，外源看起来也不大，加一个M，1kb就行了，右边还加一个，浪费了。胶底下气泡N多，放胶的时候胶不要太干，放得温柔一点就没有了，从一侧放下去。还有我觉得RNA这么远，不会掩盖质粒的，质粒要达到被掩盖的程度，那RNA也太多了，或者说质粒也太小，才1KB左右才会跟RNA混，你的质粒没那么小。 |
10楼2011-07-03 16:20:25
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