应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 提质粒浓度太小，条带不亮，有图求真相
211/3返回列表123下一页
查看: 2595  |  回复: 20
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 2 个 MolEPI ，点击这里进行查看

scelab

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫之有关部门负责人

[求助] 提质粒浓度太小，条带不亮，有图求真相

RT
之前一切都正常，现在无法重现

1 ml菌液，提完质粒50ul定容，上样2ul。如图
曾经试过多次转接；质粒重新转化新的DH5a；OD=1时添加氯霉素等方法，仍然很淡。
难道原因是摇床和LB？   求真相

回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
小木虫之有关部门负责人
1楼 2011-07-03 14:31:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cdl007

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

scelab(金币+5): 谢谢 2011-07-03 15:02:51
scelab(金币+2): 把钱发光~ 2011-07-04 10:43:09
建议做一空载体质粒的对照

看上去好像RNAse没加，RNA太浓，所以掩盖了质粒的条带？
赞一下 回复此楼
2楼2011-07-03 14:56:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

scelab(金币+6): :arm: 2011-07-03 15:05:47
1949stone(EPI+1): epi 2011-07-03 18:09:26
scelab(金币+2): 把钱发光~ 2011-07-04 10:43:15
你这图照反了吧？
这不是有条带呢吗？有就可以说明问题呀，关键看你是否要进行下游操作了，如果单单看一下大小，那完全可以了，不过可以看出来你这是手提的质粒，不然底下怎么那么多的RNA呢？以后可以提完质粒之后加一点RNA酶，放置十几分钟再点样。。。

为什么不用试剂盒提呢？你这手提产量太低了。。。一般来说手提杂质虽然多，可是量很大的。。。

你是做什么实验呢？目的是。。。？
赞一下(1人) 回复此楼
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
3楼2011-07-03 14:59:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

scelab

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫之有关部门负责人
引用回帖:
Originally posted by cdl007 at 2011-07-03 14:56:18:
建议做一空载体质粒的对照

看上去好像RNAse没加，RNA太浓，所以掩盖了质粒的条带？

没加RNAse，
左二是空载，原始质粒就很淡
赞一下 回复此楼
小木虫之有关部门负责人
4楼2011-07-03 15:02:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

scelab

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫之有关部门负责人
引用回帖:
Originally posted by 天使托 at 2011-07-03 14:59:24:
你这图照反了吧？
这不是有条带呢吗？有就可以说明问题呀，关键看你是否要进行下游操作了，如果单单看一下大小，那完全可以了，不过可以看出来你这是手提的质粒，不然底下怎么那么多的RNA呢？以后可以提完质粒之 ...

目的是要进行下一步酶切，所以必须得浓一点。而且也试过酶切，切出来的更淡
试剂盒提的更淡
先手动，自己看看，

这样的过程已经试过好多次了
赞一下 回复此楼
小木虫之有关部门负责人
5楼2011-07-03 15:05:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

scelab

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫之有关部门负责人
引用回帖:
Originally posted by 天使托 at 2011-07-03 14:59:24:
你这图照反了吧？
这不是有条带呢吗？有就可以说明问题呀，关键看你是否要进行下游操作了，如果单单看一下大小，那完全可以了，不过可以看出来你这是手提的质粒，不然底下怎么那么多的RNA呢？以后可以提完质粒之 ...

目的是要进行下一步酶切，所以必须得浓一点。而且也试过酶切，切出来的更淡
试剂盒提的更淡
先手动，自己看看，

这样的过程已经试过好多次了
赞一下 回复此楼
小木虫之有关部门负责人
6楼2011-07-03 15:05:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuxia82012

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

scelab(金币+5): 谢谢提醒啊，我之前1ml提的都跟Hind III的23k一样亮。请问你4ml的菌液，溶液123的体积是多少？ 2011-07-03 15:14:30
scelab(金币+2): 把钱发光~ 2011-07-04 10:55:19
为什么只用1mL菌液提，你不能多用点菌液提提吗？我一般都用4mL菌液的
赞一下 回复此楼
在等待中涅槃重生
7楼2011-07-03 15:09:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

luozhen2008

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

scelab(金币+5): 谢谢回复 2011-07-03 15:40:58
scelab(金币+2): 把钱发光~ 2011-07-04 10:55:25
你的LB里面有没有加抗生素？如果没有的加的话估计会很淡，其次你最好用大一点的容器来培养细菌，1ml的菌液不要用1.5EP，那样供氧量不足，不利于细菌生长。
赞一下 回复此楼
8楼2011-07-03 15:32:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

scelab

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫之有关部门负责人
引用回帖:
Originally posted by luozhen2008 at 2011-07-03 15:32:03:
你的LB里面有没有加抗生素？如果没有的加的话估计会很淡，其次你最好用大一点的容器来培养细菌，1ml的菌液不要用1.5EP，那样供氧量不足，不利于细菌生长。

确定已加抗生素
细菌是用15ml试管，4mlLB培养
赞一下(1人) 回复此楼
小木虫之有关部门负责人
9楼2011-07-03 15:40:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+5, EPI+1): 2011-07-03 18:08:40
1949stone(EPI-1): 很谦虚 2011-07-03 21:04:17
那是不是抗生素失效了？没有选择压力的时候质粒不扩增的。似乎隐约是有两条带，还隔得挺远的，莫非是两个质粒？DH5a用来表达？

如果用4毫升菌液，我觉得质粒的量应该会增多的，溶液123容量看着变化就行了。不增加用量也行，关键是看溶液2能不能使得菌液澄清，澄清了就表示足够保证效果了。

你的质粒那么小，外源看起来也不大，加一个M，1kb就行了，右边还加一个，浪费了。胶底下气泡N多，放胶的时候胶不要太干，放得温柔一点就没有了，从一侧放下去。还有我觉得RNA这么远，不会掩盖质粒的，质粒要达到被掩盖的程度，那RNA也太多了，或者说质粒也太小，才1KB左右才会跟RNA混，你的质粒没那么小。
赞一下(2人) 回复此楼
流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
10楼2011-07-03 16:20:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 scelab 的主题更新
211/3返回列表123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭