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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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scelab

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫之有关部门负责人

[求助] 提质粒浓度太小,条带不亮,有图求真相

RT
之前一切都正常,现在无法重现

1 ml菌液,提完质粒50ul定容,上样2ul。如图
曾经试过多次转接;质粒重新转化新的DH5a;OD=1时添加氯霉素等方法,仍然很淡。
难道原因是摇床和LB?   求真相

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小木虫之有关部门负责人
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scelab

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫之有关部门负责人

引用回帖:
Originally posted by 天使托 at 2011-07-03 14:59:24:
你这图照反了吧?
这不是有条带呢吗?有就可以说明问题呀,关键看你是否要进行下游操作了,如果单单看一下大小,那完全可以了,不过可以看出来你这是手提的质粒,不然底下怎么那么多的RNA呢?以后可以提完质粒之 ...

目的是要进行下一步酶切,所以必须得浓一点。而且也试过酶切,切出来的更淡
试剂盒提的更淡
先手动,自己看看,

这样的过程已经试过好多次了
小木虫之有关部门负责人
6楼2011-07-03 15:05:21
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cdl007

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

scelab(金币+5): 谢谢 2011-07-03 15:02:51
scelab(金币+2): 把钱发光~ 2011-07-04 10:43:09
建议做一空载体质粒的对照

看上去好像RNAse没加,RNA太浓,所以掩盖了质粒的条带?
2楼2011-07-03 14:56:18
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

scelab(金币+6): :arm: 2011-07-03 15:05:47
1949stone(EPI+1): epi 2011-07-03 18:09:26
scelab(金币+2): 把钱发光~ 2011-07-04 10:43:15
你这图照反了吧?
这不是有条带呢吗?有就可以说明问题呀,关键看你是否要进行下游操作了,如果单单看一下大小,那完全可以了,不过可以看出来你这是手提的质粒,不然底下怎么那么多的RNA呢?以后可以提完质粒之后加一点RNA酶,放置十几分钟再点样。。。

为什么不用试剂盒提呢?你这手提产量太低了。。。一般来说手提杂质虽然多,可是量很大的。。。

你是做什么实验呢?目的是。。。?
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
3楼2011-07-03 14:59:24
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scelab

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫之有关部门负责人

引用回帖:
Originally posted by cdl007 at 2011-07-03 14:56:18:
建议做一空载体质粒的对照

看上去好像RNAse没加,RNA太浓,所以掩盖了质粒的条带?

没加RNAse,
左二是空载,原始质粒就很淡
小木虫之有关部门负责人
4楼2011-07-03 15:02:37
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