| 查看: 3166 | 回复: 20 | |||||
| 本帖产生 2 个 MolEPI ，点击这里进行查看 | |||||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||||
scelab荣誉版主 (文坛精英)
小木虫之有关部门负责人
|
[求助]
提质粒浓度太小，条带不亮，有图求真相
|
||||
|
RT 之前一切都正常，现在无法重现  1 ml菌液，提完质粒50ul定容，上样2ul。如图 曾经试过多次转接；质粒重新转化新的DH5a；OD=1时添加氯霉素等方法，仍然很淡。  难道原因是摇床和LB？  求真相   |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 【分子生物】EPI帖 |
» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有158人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 未插入目的片段的空载体质粒怎么扩增出目的条带，求解，求真相！！！！
已经有4人回复
- 提质粒双酶切 目的带1200 为什么切出来的目的带不亮 并且看着有点弥散啊~~
已经有7人回复
- 多agent是什么东西
已经有4人回复
- RNA条带总是有杂带
已经有5人回复
- iceime会议，求真相！！！！
已经有23人回复
- 试剂盒中提质粒，浓度很小
已经有8人回复
- 新手求助：关于提质粒
已经有15人回复
- 长颈鹿和企鹅生活在同一片天空。有图有真相
已经有23人回复
- 提质粒出现4条带？
已经有15人回复
- 酶连以后的载体提质粒怎么提成了这样？？？
已经有9人回复
- 碱裂解法提质粒之怪现象
已经有16人回复
- 提质粒时如何去除RNAase
已经有5人回复
- 【求助/交流】RNA影响酶切吗？
已经有6人回复
- 【求助/交流】构建表达载体时，提质粒用小提够用吗？
已经有5人回复
- 【转帖】从小不努力，长大提质粒……
已经有33人回复
- 【求助/交流】大提质粒
已经有10人回复
- 【求助/交流】提质粒后跑的电泳图
已经有10人回复
冼亮淀粉酶
专家顾问 (知名作家)
生物大分子降解酶
-
专家经验: +248 - MolEPI: 46
- 应助: 257 (大学生)
- 贵宾: 0.272
- 金币: 19837.5
- 散金: 1704
- 红花: 121
- 帖子: 6622
- 在线: 2794小时
- 虫号: 856414
- 注册: 2009-09-25
- 性别: GG
- 专业: 环境微生物学
- 管辖: 微生物
★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+5, EPI+1): 2011-07-03 18:08:40
1949stone(EPI-1): 很谦虚 2011-07-03 21:04:17
dhd997(金币+5, EPI+1): 2011-07-03 18:08:40
1949stone(EPI-1): 很谦虚 2011-07-03 21:04:17
|
那是不是抗生素失效了？没有选择压力的时候质粒不扩增的。似乎隐约是有两条带，还隔得挺远的，莫非是两个质粒？DH5a用来表达？ 如果用4毫升菌液，我觉得质粒的量应该会增多的，溶液123容量看着变化就行了。不增加用量也行，关键是看溶液2能不能使得菌液澄清，澄清了就表示足够保证效果了。 你的质粒那么小，外源看起来也不大，加一个M，1kb就行了，右边还加一个，浪费了。胶底下气泡N多，放胶的时候胶不要太干，放得温柔一点就没有了，从一侧放下去。还有我觉得RNA这么远，不会掩盖质粒的，质粒要达到被掩盖的程度，那RNA也太多了，或者说质粒也太小，才1KB左右才会跟RNA混，你的质粒没那么小。 |
10楼2011-07-03 16:20:25
cdl007
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 41
- 应助: 46 (小学生)
- 贵宾: 0.025
- 金币: 2570.6
- 红花: 11
- 帖子: 545
- 在线: 123.1小时
- 虫号: 275133
- 注册: 2006-08-27
- 专业: 肿瘤病因
2楼2011-07-03 14:56:18
天使托
专家顾问 (职业作家)
T.Shen
-
专家经验: +57 - MolEPI: 106
- 应助: 95 (初中生)
- 贵宾: 0.263
- 金币: 16299.3
- 散金: 593
- 红花: 74
- 沙发: 9
- 帖子: 3659
- 在线: 290.6小时
- 虫号: 441757
- 注册: 2007-10-27
- 专业: 微生物生理与生物化学
- 管辖: 微生物
【答案】应助回帖
scelab(金币+6): :arm: 2011-07-03 15:05:47
1949stone(EPI+1): epi 2011-07-03 18:09:26
scelab(金币+2): 把钱发光~ 2011-07-04 10:43:15
1949stone(EPI+1): epi 2011-07-03 18:09:26
scelab(金币+2): 把钱发光~ 2011-07-04 10:43:15
|
你这图照反了吧？ 这不是有条带呢吗？有就可以说明问题呀，关键看你是否要进行下游操作了，如果单单看一下大小，那完全可以了，不过可以看出来你这是手提的质粒，不然底下怎么那么多的RNA呢？以后可以提完质粒之后加一点RNA酶，放置十几分钟再点样。。。 为什么不用试剂盒提呢？你这手提产量太低了。。。一般来说手提杂质虽然多，可是量很大的。。。 你是做什么实验呢？目的是。。。？ |
3楼2011-07-03 14:59:24
scelab
荣誉版主 (文坛精英)
小木虫之有关部门负责人
- 应助: 63 (初中生)
- 贵宾: 1.475
- 金币: 8294.6
- 散金: 4158
- 红花: 39
- 沙发: 99
- 帖子: 21277
- 在线: 3169.3小时
- 虫号: 482065
- 注册: 2007-12-20
- 性别: GG
- 专业: 环境微生物学
- 管辖: 微生物
4楼2011-07-03 15:02:37
20
投票: