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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 提质粒浓度太小，条带不亮，有图求真相
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scelab

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫之有关部门负责人

[求助] 提质粒浓度太小，条带不亮，有图求真相

RT
之前一切都正常，现在无法重现

1 ml菌液，提完质粒50ul定容，上样2ul。如图
曾经试过多次转接；质粒重新转化新的DH5a；OD=1时添加氯霉素等方法，仍然很淡。
难道原因是摇床和LB？   求真相

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小木虫之有关部门负责人
1楼 2011-07-03 14:31:30
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+5, EPI+1): 2011-07-03 18:08:40
1949stone(EPI-1): 很谦虚 2011-07-03 21:04:17
那是不是抗生素失效了？没有选择压力的时候质粒不扩增的。似乎隐约是有两条带，还隔得挺远的，莫非是两个质粒？DH5a用来表达？

如果用4毫升菌液，我觉得质粒的量应该会增多的，溶液123容量看着变化就行了。不增加用量也行，关键是看溶液2能不能使得菌液澄清，澄清了就表示足够保证效果了。

你的质粒那么小，外源看起来也不大，加一个M，1kb就行了，右边还加一个，浪费了。胶底下气泡N多，放胶的时候胶不要太干，放得温柔一点就没有了，从一侧放下去。还有我觉得RNA这么远，不会掩盖质粒的，质粒要达到被掩盖的程度，那RNA也太多了，或者说质粒也太小，才1KB左右才会跟RNA混，你的质粒没那么小。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
10楼2011-07-03 16:20:25
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
版主大人，我觉得这个还达不到EPI的水平，而且楼主在后面也解释了这些情况，所以能不能请您撤销我的EPI？多谢！
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
13楼2011-07-03 18:12:49
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