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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 提质粒浓度太小，条带不亮，有图求真相
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scelab

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫之有关部门负责人
西瓜: 我觉得保鲜膜会好用点，没那么容易起泡，嘿嘿 2011-07-03 21:04:08
引用回帖:
Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-07-03 16:20:25:
那是不是抗生素失效了？没有选择压力的时候质粒不扩增的。似乎隐约是有两条带，还隔得挺远的，莫非是两个质粒？DH5a用来表达？

如果用4毫升菌液，我觉得质粒的量应该会增多的，溶液123容量看着变化就行了。不增 ...

确定抗生素没失效，
是一个质粒，小的是超螺旋，
是DH5a的

俩M是为了方便计算大小
手提的质粒，没用70%洗，没加RNAse，地下的是一次性PE手套，看上去有泡，呵呵

其实这些都不重要，关键是，以前的量能有很多，现在少的可怜
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小木虫之有关部门负责人
11楼2011-07-03 16:33:36
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yuxia82012

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

scelab(金币+5): 谢谢。用的axygen的试剂盒，提出来比手提还淡。 2011-07-03 21:33:32
scelab(金币+2): 把钱发光~ 2011-07-04 10:55:39
引用回帖:
Originally posted by yuxia82012 at 2011-07-03 15:09:17:
为什么只用1mL菌液提，你不能多用点菌液提提吗？我一般都用4mL菌液的

好久没有手动提过了，用的试剂盒，生工的一般就是250,250,350吧，从未失手过
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在等待中涅槃重生
12楼2011-07-03 16:58:10
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
版主大人，我觉得这个还达不到EPI的水平，而且楼主在后面也解释了这些情况，所以能不能请您撤销我的EPI？多谢！
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
13楼2011-07-03 18:12:49
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ieee18

捐助贵宾 (著名写手)

桥东会务

【答案】应助回帖

1949stone: 可以开帖子 2011-07-03 21:02:58
内容已删除
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14楼2011-07-03 19:34:07
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

★
1949stone(金币+1): 鼓励 2011-07-03 21:03:07
scelab(金币+2): 你说的反是指上样孔在上面啊，我习惯下面，呵呵 2011-07-03 21:34:11
scelab(金币+2): 把钱发光~ 2011-07-04 10:55:53
引用回帖:
Originally posted by scelab at 2011-07-03 15:02:37:
没加RNAse，
左二是空载，原始质粒就很淡

你还是把图倒过来比较好一些吧？
哪边是marker呢？
原始质粒是指你提的空载体吗？
这个空载体你可以重新提取呀。。。没有什么问题的。。。
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
15楼2011-07-03 19:49:45
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
★ ★ ★ ★ ★
1949stone(EPI+1): 来了 2011-07-03 21:03:17
西瓜(金币+5, EPI+1): Good！ 2011-07-03 21:04:40
scelab(金币+10): 现在的根本问题可能是拷贝数不高，而且原因未知:cry: 2011-07-03 21:34:58
1949stone(EPI-1): 重复了啊 2011-07-04 10:37:24
引用回帖:
Originally posted by scelab at 2011-07-03 15:05:21:
目的是要进行下一步酶切，所以必须得浓一点。而且也试过酶切，切出来的更淡
试剂盒提的更淡
先手动，自己看看，

这样的过程已经试过好多次了

我来先对比一下手提和试剂盒提的优缺点吧，要说验证的话，比如说双酶切什么的，这个还是用试剂盒提取的比较好一些，因为试剂盒提取的质粒相对来说纯度高一些，杂质不至于影响后期酶切反应中的内切酶，当然试剂盒提取的质粒还可以进行转化等等实验；如果是手提的话，不太利于双酶切，原因上面已经说了，也并不是说手提的质粒量一定大，这个要看该质粒在菌种是否高拷贝了；

既然你现在要进行酶切，最好用试剂盒进行提取吧，菌可以取多一些，也不一定要用菌液进行质粒提取啊？我基本不用菌液提取，一般都是将菌划在抗生素板子上，这样长的多，可以刮多一些菌，这样提取出来的质粒肯定很不错，具体就看操作了。。。

祝你好运啊。。。不过你可以看看我前两天的那个原创帖，里面很多相信对你有帮助。。。
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
16楼2011-07-03 19:54:20
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
to 楼主：拷贝数不高很正常，要看在什么宿主菌里了，大肠一般拷贝数比较高，你那是什么菌呢？或许本身载体在里面质粒拷贝数就不高吧。。。当然，只能多提了。。。
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
17楼2011-07-03 21:39:34
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scelab

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫之有关部门负责人
引用回帖:
Originally posted by 天使托 at 2011-07-03 21:39:34:
to 楼主：拷贝数不高很正常，要看在什么宿主菌里了，大肠一般拷贝数比较高，你那是什么菌呢？或许本身载体在里面质粒拷贝数就不高吧。。。当然，只能多提了。。。

载体：DH5a，
之前拷贝数很高的，那现在只能多提了
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小木虫之有关部门负责人
18楼2011-07-03 21:42:47
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trees2011

铜虫 (小有名气)
★ ★
西瓜(金币+2): 鼓励新虫 2011-07-04 18:03:02
菌液污染了吧.
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学历是铜牌，能力是银牌，人脉是金牌，idea是王牌
19楼2011-07-04 16:58:05
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billy8580

新虫 (初入文坛)
菌液太少了，提出来浓度比较低，另外摇菌时间要掌握好，别太短了。
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20楼2011-07-10 00:49:51
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