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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 提质粒浓度太小，条带不亮，有图求真相
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scelab

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫之有关部门负责人

[求助] 提质粒浓度太小，条带不亮，有图求真相

RT
之前一切都正常，现在无法重现

1 ml菌液，提完质粒50ul定容，上样2ul。如图
曾经试过多次转接；质粒重新转化新的DH5a；OD=1时添加氯霉素等方法，仍然很淡。
难道原因是摇床和LB？   求真相

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小木虫之有关部门负责人
1楼 2011-07-03 14:31:30
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scelab

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫之有关部门负责人
引用回帖:
Originally posted by 天使托 at 2011-07-03 21:39:34:
to 楼主：拷贝数不高很正常，要看在什么宿主菌里了，大肠一般拷贝数比较高，你那是什么菌呢？或许本身载体在里面质粒拷贝数就不高吧。。。当然，只能多提了。。。

载体：DH5a，
之前拷贝数很高的，那现在只能多提了
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小木虫之有关部门负责人
18楼2011-07-03 21:42:47
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查看全部 21 个回答

cdl007

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

scelab(金币+5): 谢谢 2011-07-03 15:02:51
scelab(金币+2): 把钱发光~ 2011-07-04 10:43:09
建议做一空载体质粒的对照

看上去好像RNAse没加，RNA太浓，所以掩盖了质粒的条带？
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2楼2011-07-03 14:56:18
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

scelab(金币+6): :arm: 2011-07-03 15:05:47
1949stone(EPI+1): epi 2011-07-03 18:09:26
scelab(金币+2): 把钱发光~ 2011-07-04 10:43:15
你这图照反了吧？
这不是有条带呢吗？有就可以说明问题呀，关键看你是否要进行下游操作了，如果单单看一下大小，那完全可以了，不过可以看出来你这是手提的质粒，不然底下怎么那么多的RNA呢？以后可以提完质粒之后加一点RNA酶，放置十几分钟再点样。。。

为什么不用试剂盒提呢？你这手提产量太低了。。。一般来说手提杂质虽然多，可是量很大的。。。

你是做什么实验呢？目的是。。。？
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
3楼2011-07-03 14:59:24
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scelab

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫之有关部门负责人
引用回帖:
Originally posted by cdl007 at 2011-07-03 14:56:18:
建议做一空载体质粒的对照

看上去好像RNAse没加，RNA太浓，所以掩盖了质粒的条带？

没加RNAse，
左二是空载，原始质粒就很淡
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小木虫之有关部门负责人
4楼2011-07-03 15:02:37
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