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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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scelab

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫之有关部门负责人

[求助] 提质粒浓度太小，条带不亮，有图求真相

RT
之前一切都正常，现在无法重现

1 ml菌液，提完质粒50ul定容，上样2ul。如图
曾经试过多次转接；质粒重新转化新的DH5a；OD=1时添加氯霉素等方法，仍然很淡。
难道原因是摇床和LB？   求真相

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小木虫之有关部门负责人
1楼 2011-07-03 14:31:30
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
★ ★ ★ ★ ★
1949stone(EPI+1): 来了 2011-07-03 21:03:17
西瓜(金币+5, EPI+1): Good！ 2011-07-03 21:04:40
scelab(金币+10): 现在的根本问题可能是拷贝数不高，而且原因未知:cry: 2011-07-03 21:34:58
1949stone(EPI-1): 重复了啊 2011-07-04 10:37:24
引用回帖:
Originally posted by scelab at 2011-07-03 15:05:21:
目的是要进行下一步酶切，所以必须得浓一点。而且也试过酶切，切出来的更淡
试剂盒提的更淡
先手动，自己看看，

这样的过程已经试过好多次了

我来先对比一下手提和试剂盒提的优缺点吧，要说验证的话，比如说双酶切什么的，这个还是用试剂盒提取的比较好一些，因为试剂盒提取的质粒相对来说纯度高一些，杂质不至于影响后期酶切反应中的内切酶，当然试剂盒提取的质粒还可以进行转化等等实验；如果是手提的话，不太利于双酶切，原因上面已经说了，也并不是说手提的质粒量一定大，这个要看该质粒在菌种是否高拷贝了；

既然你现在要进行酶切，最好用试剂盒进行提取吧，菌可以取多一些，也不一定要用菌液进行质粒提取啊？我基本不用菌液提取，一般都是将菌划在抗生素板子上，这样长的多，可以刮多一些菌，这样提取出来的质粒肯定很不错，具体就看操作了。。。

祝你好运啊。。。不过你可以看看我前两天的那个原创帖，里面很多相信对你有帮助。。。
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
16楼2011-07-03 19:54:20
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cdl007

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

scelab(金币+5): 谢谢 2011-07-03 15:02:51
scelab(金币+2): 把钱发光~ 2011-07-04 10:43:09
建议做一空载体质粒的对照

看上去好像RNAse没加，RNA太浓，所以掩盖了质粒的条带？
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2楼2011-07-03 14:56:18
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

scelab(金币+6): :arm: 2011-07-03 15:05:47
1949stone(EPI+1): epi 2011-07-03 18:09:26
scelab(金币+2): 把钱发光~ 2011-07-04 10:43:15
你这图照反了吧？
这不是有条带呢吗？有就可以说明问题呀，关键看你是否要进行下游操作了，如果单单看一下大小，那完全可以了，不过可以看出来你这是手提的质粒，不然底下怎么那么多的RNA呢？以后可以提完质粒之后加一点RNA酶，放置十几分钟再点样。。。

为什么不用试剂盒提呢？你这手提产量太低了。。。一般来说手提杂质虽然多，可是量很大的。。。

你是做什么实验呢？目的是。。。？
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
3楼2011-07-03 14:59:24
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scelab

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫之有关部门负责人
引用回帖:
Originally posted by cdl007 at 2011-07-03 14:56:18:
建议做一空载体质粒的对照

看上去好像RNAse没加，RNA太浓，所以掩盖了质粒的条带？

没加RNAse，
左二是空载，原始质粒就很淡
赞一下 回复此楼
小木虫之有关部门负责人
4楼2011-07-03 15:02:37
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查看全部 21 个回答
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