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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 提质粒浓度太小，条带不亮，有图求真相
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scelab

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫之有关部门负责人

[求助] 提质粒浓度太小，条带不亮，有图求真相

RT
之前一切都正常，现在无法重现

1 ml菌液，提完质粒50ul定容，上样2ul。如图
曾经试过多次转接；质粒重新转化新的DH5a；OD=1时添加氯霉素等方法，仍然很淡。
难道原因是摇床和LB？   求真相

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小木虫之有关部门负责人
1楼 2011-07-03 14:31:30
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scelab

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫之有关部门负责人
西瓜: 我觉得保鲜膜会好用点，没那么容易起泡，嘿嘿 2011-07-03 21:04:08
引用回帖:
Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-07-03 16:20:25:
那是不是抗生素失效了？没有选择压力的时候质粒不扩增的。似乎隐约是有两条带，还隔得挺远的，莫非是两个质粒？DH5a用来表达？

如果用4毫升菌液，我觉得质粒的量应该会增多的，溶液123容量看着变化就行了。不增 ...

确定抗生素没失效，
是一个质粒，小的是超螺旋，
是DH5a的

俩M是为了方便计算大小
手提的质粒，没用70%洗，没加RNAse，地下的是一次性PE手套，看上去有泡，呵呵

其实这些都不重要，关键是，以前的量能有很多，现在少的可怜
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小木虫之有关部门负责人
11楼2011-07-03 16:33:36
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cdl007

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

scelab(金币+5): 谢谢 2011-07-03 15:02:51
scelab(金币+2): 把钱发光~ 2011-07-04 10:43:09
建议做一空载体质粒的对照

看上去好像RNAse没加，RNA太浓，所以掩盖了质粒的条带？
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2楼2011-07-03 14:56:18
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

scelab(金币+6): :arm: 2011-07-03 15:05:47
1949stone(EPI+1): epi 2011-07-03 18:09:26
scelab(金币+2): 把钱发光~ 2011-07-04 10:43:15
你这图照反了吧？
这不是有条带呢吗？有就可以说明问题呀，关键看你是否要进行下游操作了，如果单单看一下大小，那完全可以了，不过可以看出来你这是手提的质粒，不然底下怎么那么多的RNA呢？以后可以提完质粒之后加一点RNA酶，放置十几分钟再点样。。。

为什么不用试剂盒提呢？你这手提产量太低了。。。一般来说手提杂质虽然多，可是量很大的。。。

你是做什么实验呢？目的是。。。？
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
3楼2011-07-03 14:59:24
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scelab

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫之有关部门负责人
引用回帖:
Originally posted by cdl007 at 2011-07-03 14:56:18:
建议做一空载体质粒的对照

看上去好像RNAse没加，RNA太浓，所以掩盖了质粒的条带？

没加RNAse，
左二是空载，原始质粒就很淡
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小木虫之有关部门负责人
4楼2011-07-03 15:02:37
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