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雨林碟影

铜虫 (初入文坛)

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[交流] PGEX为何胶回收时只做双酶切？已有5人参与

转了几次都不长
  怀疑载体出了问题
  今早又重新提质粒PGEX
  PGEX为何只做双酶切？而不做单酶切

都做到最后一步转菌了
但不长

[ Last edited by 1949stone on 2011-6-1 at 11:38 ]

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1楼 2011-06-01 10:59:59

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d1emon

铜虫 (初入文坛)

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dhd997(金币+2): good 2011-06-02 09:07:09

1、单酶切也可以，只是连接的目的片段有方向问题，转化成功后需要进一步筛选，所以大都采用双酶切。
2、转化不成功大都是连接体系的问题，看看你的酶切产物的浓度是否合适，还有就是换个新制备的感受态细胞试试。

赞一下(2人)

4楼2011-06-02 06:19:08

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雨林碟影

铜虫 (初入文坛)

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都做到最后一步转菌了
但不长

2楼2011-06-01 11:00:48

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chiangscn

银虫 (正式写手)

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dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-06-02 09:06:55

很可能是你的感受态细胞失效了，用pUC等测试过吗?

赞一下(1人)

wholaughslastlaughsbest

3楼2011-06-01 20:29:00

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yabxxh

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dhd997(金币+2): good 2011-06-02 18:49:21

载体一般不会有问题的，连接酶没有失活吧，转化做阳性对照了吗？感受态细胞有没有做过测试，效率如何。连接温度是否合适，时间是否足够。
这些问题都回答了，你就做出来了

赞一下(2人)

5楼2011-06-02 09:48:19

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