应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PGEX为何胶回收时只做双酶切？
81/1返回列表
查看: 1785  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

雨林碟影

铜虫 (初入文坛)

[交流] PGEX为何胶回收时只做双酶切？ 已有5人参与

转了几次都不长
  怀疑载体出了问题
  今早又重新提质粒PGEX
  PGEX为何只做双酶切？而不做单酶切


都做到最后一步转菌了
但不长

[ Last edited by 1949stone on 2011-6-1 at 11:38 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-06-01 10:59:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

雨林碟影

铜虫 (初入文坛)
都做到最后一步转菌了
但不长
赞一下 回复此楼
2楼2011-06-01 11:00:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chiangscn

银虫 (正式写手)
★ ★
dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-06-02 09:06:55
很可能是你的感受态细胞失效了，用pUC等测试过吗?
赞一下(1人) 回复此楼
wholaughslastlaughsbest
3楼2011-06-01 20:29:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

d1emon

铜虫 (初入文坛)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
dhd997(金币+2): good 2011-06-02 09:07:09
1、单酶切也可以，只是连接的目的片段有方向问题，转化成功后需要进一步筛选，所以大都采用双酶切。
2、转化不成功大都是连接体系的问题，看看你的酶切产物的浓度是否合适，还有就是换个新制备的感受态细胞试试。
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2011-06-02 06:19:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yabxxh

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
dhd997(金币+2): good 2011-06-02 18:49:21
载体一般不会有问题的，连接酶没有失活吧，转化做阳性对照了吗？感受态细胞有没有做过测试，效率如何。连接温度是否合适，时间是否足够。
这些问题都回答了，你就做出来了
赞一下(2人) 回复此楼
5楼2011-06-02 09:48:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

雨林碟影

铜虫 (初入文坛)
转了三次了，都是不长
连接体系是10ul，一个小时，T4连接酶0.2ul,感受态换过了
都做到了最后一步还是这个样子
赞一下 回复此楼
6楼2011-06-02 14:54:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ET生物人

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+3): 欢迎交流 2011-06-03 11:01:05
引用回帖:
Originally posted by 雨林碟影 at 2011-06-02 14:54:40:
转了三次了，都是不长
连接体系是10ul，一个小时，T4连接酶0.2ul,感受态换过了
都做到了最后一步还是这个样子

确定你的载体是正确的？？pGEX载体上的抗性基因与你用的平板的抗性基因一致？尝试一下换另一个载体来做！！
赞一下(2人) 回复此楼
7楼2011-06-03 09:59:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sci1234

金虫 (小有名气)

路人甲
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你是转了三次都不长，我的是转了两次都只把空载体转进去了，没有连上目的基因，载体也不自连。不过你的情况我在做其他载体时遇到过，当时我做不出来的原因可能是没有酶切好，并且你酶切回收时要把琼脂去干净，否则会影响连接和转化。
赞一下 回复此楼
sci1234
8楼2012-12-12 21:23:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 雨林碟影 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 中科院海洋所招收海洋材料相关领域博士研究生及研究助理 +3 sujiner 2026-10-08 4/200 2026-10-14 20:40 by qicaiyun
[有机交流] OpenAI又攻克数学难题了，离AI做有机合成还有多远？ +8 wangyl_123 2026-10-10 13/650 2026-10-14 15:12 by zuesli
[硕博家园] 极限拉扯，如何抉择 +10 Isak0320 2026-10-12 14/700 2026-10-14 11:39 by thegarfield
[教师之家] 课题组会帮你通过考核么？ +4 好运来～9527 2026-10-10 7/350 2026-10-13 08:41 by xli1984
[基金申请] 入职后第一次管课题组的专利缴费，对账才发现官费比别人多掏了一倍 +6 13108017953 2026-10-08 6/300 2026-10-12 20:07 by w3w3y3
[公派出国] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:34 by XQNyDCa1Tk5n
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:15 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 22:11 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:06 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 14:25 by VOMexwnDzOFZ
[教师之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 (EPI+-1)(金币-50) +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 14:05 by VOMexwnDzOFZ
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:51 by VOMexwnDzOFZ
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:45 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:54 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:34 by VOMexwnDzOFZ
[考博] 招收博士生一名 +3 mandolin 2026-10-10 3/150 2026-10-11 10:21 by 不是山谷！
[有机交流] 各位大佬，路线设计求助 +6 zapen 2026-10-08 8/400 2026-10-10 15:59 by zapen
[有机交流] 我应该选哪条合成路线让实验成功率高一些？ +5 jing816y 2026-10-08 9/450 2026-10-10 09:05 by zapen
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭