| 查看: 3677 | 回复: 12 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
baby1_9253344金虫 (小有名气)
|
[求助]
酵母质粒转化及提取验证问题求助
|
|
|
最近需将穿梭质粒转入啤酒酵母W303内，用化学法（醋酸锂）转化，URA选择性平板培养数日后终于出现阳性菌落。为了鉴定阳性转化子是否转入质粒，我挑了阳性菌落，用酵母质粒抽提试剂盒提取了质粒，用这个质粒转入DH5alfa（50ul感受态细胞，5ul质粒），但平板上没有阳性菌落。随后又重复转DH5alfa（100ul感受态细胞，10ul质粒），仍无阳性转化子。现在不知道该怎么办了，求助各位~ 现在问题很多，很乱： 1，转DH5a失败原因可能在转化操作，也可能是质粒的问题。因为之前老外邮寄过来的质粒就是先在DH5a里扩增的，因此前者可排除。所以就是质粒出了问题。 2，质粒的问题有二：要么根本没转进酵母，要么试剂盒没提出质粒。 3，要想验证问题2，是应该做PCR验证还是直接将酵母里提出的质粒测序？ 4，酵母质粒抽提时候，摇菌条件对质粒影响大吗？试剂盒说明上说过度培养会使ＤＮＡ降解；坛子里有虫子说要酵母菌液１０ｍｌ，那最后洗脱使用洗脱剂体积多少合适？ 先谢过各位了～ |
回复此楼» 猜你喜欢
085801电气专硕272求调剂
已经有22人回复
-
求计算机方向调剂
已经有6人回复
-
湖南大学刘巧玲课题组2026年第二批次博士研究生招生信息
已经有3人回复
-
通信工程求调剂！！！
已经有7人回复
-
26药学专硕105500求调剂
已经有8人回复
-
297，工科调剂?
已经有11人回复
-
申博自荐
已经有4人回复
-
294求调剂
已经有9人回复
-
289 分105500药学专硕求调剂(找B区学校)
已经有5人回复
-
291求调剂
已经有11人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 红酵母油脂的提取
已经有5人回复
- 酵母转化验证方法
已经有15人回复
- 酵母表达 转化子PCR验证
已经有9人回复
- 线性化质粒相关问题
已经有7人回复
- 酵母氨基酸营养缺陷型的验证问题
已经有7人回复
- 如何从平板上看酵母转化子是否是酵母
已经有9人回复
- 大提质粒遇到的问题
已经有10人回复
- 酵母转化假阳性
已经有11人回复
- 酵母质粒转化的问题！急！！！大家请关注
已经有5人回复
- 质粒转染成功后质粒小提出现了问题
已经有4人回复
- 酵母转化的问题
已经有7人回复
- 关于酵母启动子和质粒的问题
已经有5人回复
- 求助啊！转质粒出现问题了！
已经有13人回复
- 啤酒酵母质粒转化求助
已经有7人回复
- 【求助/交流】表达载体转化后,提取的质粒和原来不一样了啊
已经有5人回复
- 【求助/交流】质粒转化
已经有10人回复
- 【求助/交流】质粒提取线性化的很多
已经有8人回复
- 【求助/交流】弱弱地问一句，质粒提取试剂盒使用前需要灭菌吗
已经有12人回复
- 【求助/交流】分离酵母质粒
已经有12人回复
- 【求助/交流】酵母菌落PCR
已经有12人回复
- 【求助/交流】求助酿酒酵母转化
已经有3人回复
墨香若水
木虫 (著名写手)
小小囧虫
- 应助: 15 (小学生)
- 金币: 3059.1
- 散金: 942
- 红花: 10
- 沙发: 1
- 帖子: 1408
- 在线: 255.2小时
- 虫号: 528502
- 注册: 2008-03-19
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
10楼2011-05-29 01:13:09
baby1_9253344
金虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 3872.7
- 散金: 53
- 红花: 1
- 帖子: 287
- 在线: 519小时
- 虫号: 535686
- 注册: 2008-03-29
- 性别: MM
- 专业: 样品前处理方法与技术
2楼2011-05-26 20:09:54
baby1_9253344
金虫 (小有名气)
 |
3楼2011-05-27 10:12:41
4楼2011-05-27 14:57:56
