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生命核心

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[求助] pcr产物问题请教大家

梯度PCR，50-60退火。其他条件常规，每个温度都有得到产物，设定的产物大小70bp，据marker判断为40-60之间，引物20bp左右，应该不是二聚体，胶浓度3%。多次做结果基本一致，比较疑惑，请教大家！谢谢了！

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1楼 2011-05-23 16:19:20

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nininini

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【答案】应助回帖

我的也是同样，只加引物对照显示其实就是引物二聚体，如果产物量高的话，小条带基本就没有了，不影响结果的吧

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3楼2011-05-23 18:57:12

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adslye

银虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

★ ★
silicare(金币+2): 有道理 2011-05-23 18:31:39

引用回帖:

Originally posted by 生命核心 at 2011-05-23 16:19:20:
梯度PCR，50-60退火。其他条件常规，每个温度都有得到产物，设定的产物大小70bp，据marker判断为40-60之间，引物20bp左右，应该不是二聚体，胶浓度3%。多次做结果基本一致，比较疑惑，请教大家！谢谢了！

疑惑什么？
如果怕二聚体的话做个空白对照：只加引物。

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2楼2011-05-23 17:05:06

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生命核心

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引用回帖:

Originally posted by adslye at 2011-05-23 17:05:06:
疑惑什么？
如果怕二聚体的话做个空白对照：只加引物。

谢谢指导空白对照做了不是的目前就只有分子量感觉差10-20bp对不上这个原因是什么呢谢谢

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4楼2011-05-23 20:34:12

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Originally posted by nininini at 2011-05-23 18:57:12:
我的也是同样，只加引物对照显示其实就是引物二聚体，如果产物量高的话，小条带基本就没有了，不影响结果的吧

谢谢建议作的片断分子量较小还不是二聚体就是分子量差10-20bp对不上这个原因不明

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5楼2011-05-23 20:36:13

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