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pcr产物问题请教大家
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pcr产物问题请教大家
梯度PCR,50-60退火。其他条件常规,每个温度都有得到产物,设定的产物大小70bp,据marker判断为40-60之间,引物20bp左右,应该不是二聚体,胶浓度3%。多次做结果基本一致,比较疑惑,请教大家!谢谢了!
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2011-05-23 16:19:20
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【答案】应助回帖
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silicare(金币+2): 有道理 2011-05-23 18:31:39
引用回帖:
Originally posted by
生命核心
at 2011-05-23 16:19:20:
梯度PCR,50-60退火。其他条件常规,每个温度都有得到产物,设定的产物大小70bp,据marker判断为40-60之间,引物20bp左右,应该不是二聚体,胶浓度3%。多次做结果基本一致,比较疑惑,请教大家!谢谢了!
疑惑什么?
如果怕二聚体的话做个空白对照:只加引物。
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2楼
2011-05-23 17:05:06
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【答案】应助回帖
生命核心(金币+3): 好的 非常感谢 准备PAGE胶 2011-05-24 09:18:44
引用回帖:
Originally posted by
生命核心
at 2011-05-23 20:34:12:
谢谢指导 空白对照做了 不是的 目前就只有分子量感觉差10-20bp对不上 这个原因是什么呢 谢谢
从你的描述中感觉不确定是否缺失了碱基对吧?
1.你用的Marker是100bp最小单位?换更小的Marker精确定下分子量。
2.做个TA克隆测序。
3.不爽的话跑PAGE胶
。
4.结合你下一步实验,假设目前P的产物正确,继续实验。因为确定P出了大小差不多的东西,而且很干净。除了模板有问题,基本不会因为PCR过程导致的缺失。所以在实验代价可以承受范围内,可以选择继续实验。
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6楼
2011-05-23 22:03:45
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