24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 1127  |  回复: 5

生命核心

木虫 (正式写手)

[求助] pcr产物问题请教大家

梯度PCR,50-60退火。其他条件常规,每个温度都有得到产物,设定的产物大小70bp,据marker判断为40-60之间,引物20bp左右,应该不是二聚体,胶浓度3%。多次做结果基本一致,比较疑惑,请教大家!谢谢了!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

adslye

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
silicare(金币+2): 有道理 2011-05-23 18:31:39
引用回帖:
Originally posted by 生命核心 at 2011-05-23 16:19:20:
梯度PCR,50-60退火。其他条件常规,每个温度都有得到产物,设定的产物大小70bp,据marker判断为40-60之间,引物20bp左右,应该不是二聚体,胶浓度3%。多次做结果基本一致,比较疑惑,请教大家!谢谢了!

疑惑什么?
如果怕二聚体的话做个空白对照:只加引物。
2楼2011-05-23 17:05:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nininini

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我的也是同样,只加引物对照显示其实就是引物二聚体,如果产物量高的话,小条带基本就没有了,不影响结果的吧
3楼2011-05-23 18:57:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

生命核心

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by adslye at 2011-05-23 17:05:06:
疑惑什么?
如果怕二聚体的话做个空白对照:只加引物。

谢谢指导 空白对照做了 不是的 目前就只有分子量感觉差10-20bp对不上 这个原因是什么呢 谢谢
4楼2011-05-23 20:34:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

生命核心

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by nininini at 2011-05-23 18:57:12:
我的也是同样,只加引物对照显示其实就是引物二聚体,如果产物量高的话,小条带基本就没有了,不影响结果的吧

谢谢建议 作的片断分子量较小 还不是二聚体 就是分子量差10-20bp对不上 这个原因不明
5楼2011-05-23 20:36:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

adslye

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

生命核心(金币+3): 好的 非常感谢 准备PAGE胶 2011-05-24 09:18:44
引用回帖:
Originally posted by 生命核心 at 2011-05-23 20:34:12:
谢谢指导 空白对照做了 不是的 目前就只有分子量感觉差10-20bp对不上 这个原因是什么呢 谢谢

从你的描述中感觉不确定是否缺失了碱基对吧?
1.你用的Marker是100bp最小单位?换更小的Marker精确定下分子量。
2.做个TA克隆测序。
3.不爽的话跑PAGE胶
4.结合你下一步实验,假设目前P的产物正确,继续实验。因为确定P出了大小差不多的东西,而且很干净。除了模板有问题,基本不会因为PCR过程导致的缺失。所以在实验代价可以承受范围内,可以选择继续实验。
6楼2011-05-23 22:03:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 生命核心 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 085404 298分求调剂 +10 呼啦呼啦呼呼呼 2026-04-10 11/550 2026-04-10 16:44 by wangy0907
[考研] 材料与化工300求调剂 +31 肖开文 2026-04-09 33/1650 2026-04-10 16:26 by Kilig0317
[考研] 336材料与化工085600求调剂 +21 水星记infp 2026-04-05 24/1200 2026-04-10 15:28 by luoyongfeng
[考研] 调剂 +24 不逢春 2026-04-07 25/1250 2026-04-10 09:39 by 690616278
[考研] 275求调剂 +6 1624447980 2026-04-08 7/350 2026-04-10 08:06 by 探123
[考研] 085500求调剂材料 +8 易11122 2026-04-09 8/400 2026-04-09 23:15 by parmtree
[考研] 267求调剂 +5 再忙也要吃饭啊 2026-04-09 5/250 2026-04-09 18:47 by stone_128
[考研] 求调剂希望还是希望在山河四省附近 +3 快乐的小白鸽 2026-04-05 3/150 2026-04-09 17:36 by wp06
[考研] 085400电子信息类(川大控制工程)求调剂可跨专业 求老师联系 +3 626776879 2026-04-08 3/150 2026-04-09 16:05 by 猪会飞
[考研] 考研求调剂 +4 雯??? 2026-04-08 4/200 2026-04-08 21:44 by 土木硕士招生
[考研] 0703调剂,一志愿天津大学319分 +23 haaaabcd 2026-04-05 26/1300 2026-04-08 16:19 by luoyongfeng
[考研] 331求调剂 +5 张元一 2026-04-07 6/300 2026-04-07 22:13 by hemengdong
[考研] 301求调剂 +18 121. 2026-04-04 18/900 2026-04-07 17:49 by 蓝云思雨
[考研] 307求调剂 +3 所念及所望 2026-04-06 3/150 2026-04-06 17:30 by 土木硕士招生
[考研] 一志愿211生物学280分 求调剂 +5 李rien 2026-04-05 5/250 2026-04-06 10:30 by zhyzzh
[考研] 材料调剂 +14 壹贰贰亿 2026-04-04 14/700 2026-04-05 23:31 by 来看流星雨10
[考研] 283求调剂 +5 baiiyu 2026-04-05 6/300 2026-04-05 20:35 by 啵啵啵0119
[考研] 材料383求调剂 +5 郭阳阳阳成 2026-04-04 5/250 2026-04-04 19:06 by dongzh2009
[考研] 一志愿重庆大学085404,总分314分,求调剂 +4 zf83hn 2026-04-03 4/200 2026-04-03 21:25 by 啵啵啵0119
[考研] 学硕288调剂!!! +3 小王xw123 2026-04-03 3/150 2026-04-03 21:20 by 啵啵啵0119
信息提示
请填处理意见