应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 酶切质粒时，怎样鉴定质粒是否被切开了啊？
51/1返回列表
查看: 5806  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

11wm11

银虫 (小有名气)

[求助] 酶切质粒时，怎样鉴定质粒是否被切开了啊？

酶切质粒时，怎样鉴定质粒是否被切开了啊？
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-05-15 06:24:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

疯狂修行者

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 11wm11 at 2011-05-15 21:15:13:
谢谢哈，我是做连接转化的新手，挑的菌都没有目的片段，所以我怀疑是不是质粒没切好啊。晚上跑过电泳发现质粒酶切前后不在同一条线上，应该能说明质粒切好了吧。

质粒提取后有三条带，是超螺旋、开环和复制中间体。你说的酶切后不再一条线上，是和其中两条不在一条线上吧？如果是双酶切，那就应该是两条。如果是单酶切，就应该是和其他一条差不多大小的。
赞一下 回复此楼
戒骄戒躁，坦荡做人，平常心做事，享受生活之美！！
7楼2011-05-21 14:31:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

cdl007

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+6, EPI+1): good 2011-05-15 09:48:03
根据说明书，确定酶切条件，温度，时间

一般是2到3个小时，或者难切一点的过夜

完后加入loadingbuffer，跑琼脂糖凝胶电泳，

一般分以下几个孔，
marker ，  原始质粒， 一个酶单切，  另一个单切， 两个酶双切

单切的两个条带一样大小，但是比原始质粒跑的慢

双切的如果有连入片段，就会是两条带，一小一大
如果没有连入片段，应该跟单切位置差不多大
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-05-15 06:42:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

疯狂修行者

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+5): good 2011-05-15 09:48:16
11wm11(金币+2): 2011-05-15 21:09:19
11wm11(金币+1): 2011-05-17 21:25:16
首先，你提完的质粒跑电泳应该是三条带，等酶切后跑电泳是一条带了。

   如果你连上目的条带，你酶切后的条带大小，应该是质粒大小加目的条带的大小。

   如果你做的双酶切，应该是两条带，一条是你目的条带的大小，一条是质粒大小。
赞一下(1人) 回复此楼
戒骄戒躁，坦荡做人，平常心做事，享受生活之美！！
3楼2011-05-15 08:51:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

太极拳

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
1949stone(金币+2): 鼓励 2011-05-15 19:44:31
11wm11(金币+2): 2011-05-15 21:09:36
补充下，你选的酶最好是单切割位点的，并且所连片段中不会有酶切位点。这样效果最好了！最能说明问题！
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-05-15 18:42:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 0XLacIJUOj8D 2026-08-24 3/150 2026-08-25 01:47 by BZKMTicpDhFj
[论文投稿] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 0XLacIJUOj8D 2026-08-24 3/150 2026-08-24 21:59 by BZKMTicpDhFj
[基金申请] 我面上完蛋了 +9 且听虎啸 2026-08-20 10/500 2026-08-24 20:08 by 苦寒来香
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +21 koalala 2026-08-24 24/1200 2026-08-24 19:25 by 家与远方
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +14 ziyangfang 2026-08-19 17/850 2026-08-24 18:37 by 哈哈蛤？
[基金申请] 朋友圈看到的 +7 wangzilk 2026-08-18 9/450 2026-08-24 10:50 by cmrandy
[基金申请] 让我中一个面上吧！ +13 大萍1987 2026-08-20 16/800 2026-08-24 10:23 by 太傻了
[基金申请] 放榜前的不淡定 20+4 snowwithsea 2026-08-19 17/850 2026-08-24 10:20 by echo8914667
[基金申请] 科研孤儿太难了 +18 我4大白菜 2026-08-20 19/950 2026-08-24 09:47 by 凯恩广盛催化分�
[基金申请] 什么时候开奖？ +10 CrisMessi 2026-08-18 11/550 2026-08-24 06:50 by 开心的小狮子
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办？ +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 今天放榜吗？ +15 布布和一二 2026-08-19 16/800 2026-08-23 09:55 by 张春生
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +24 yaoyewhu2008 2026-08-20 26/1300 2026-08-22 17:43 by kammury
[基金申请] 今天基金会出结果吗？20260819 +16 kkkl_v 2026-08-19 17/850 2026-08-22 16:12 by 阿布Abu
[基金申请] 时间戳今天，20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 看来今天不会放榜了？ +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧？ +4 哈哈蛤？ 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 重要消息，中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭