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丝状真菌的基因敲除
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我最近要敲除掉曲霉里面的两个基因，大概的方案如下： 单独敲除1基因，单独敲除2基因，以及将两个基因都敲除，来研究他们的功能。单独敲除一个基因的载体我都获得了，是通过农杆菌介导转化的，可是不知道如何来进行基因的双敲除载体的构建，不知道真菌里面有没有双交换的概念。有没有做真菌基因敲除的高手啊，真是不慎感激啊！ |
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jinkui960
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【答案】应助回帖
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scelab(金币+5, EPI+1): 欢迎常来交流 2011-06-27 20:12:56
scelab(金币+5, EPI+1): 欢迎常来交流 2011-06-27 20:12:56
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尽管你构建了敲除一个基因的载体，但看来你不太明白敲除的原理，真菌基因敲除一般是基于同源重组技术的，也有基于随机插入突变的。基因敲除方法可以参考文献：“A high-throughput gene knockout procedure for Neurospora reveals functions for multiple transcription factors. Proc Natl Acad Sci USA 103: 10352–10357.” 建议你认真研究一下你自己构建载体的原理，如果你要进行双敲除的话，得选择另一个筛选标记，如hph和Bar等，载体构建的方法和你敲除基因1的方法是相同的，只是把筛选标记换成另一种！ 祝好运！ |
7楼2011-06-27 19:21:25
syn1985
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4楼2011-06-27 14:11:28
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