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ldy-529

银虫 (小有名气)

[求助] 丝状真菌的基因敲除

我最近要敲除掉曲霉里面的两个基因,大概的方案如下:
单独敲除1基因,单独敲除2基因,以及将两个基因都敲除,来研究他们的功能。单独敲除一个基因的载体我都获得了,是通过农杆菌介导转化的,可是不知道如何来进行基因的双敲除载体的构建,不知道真菌里面有没有双交换的概念。有没有做真菌基因敲除的高手啊,真是不慎感激啊!
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gumingzhu

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by syn1985 at 2011-05-03 17:18:20:
我也在进行这方面的研究,不过做的不是真菌而是放线菌,因为工作还未做到那一步所以经验肯定没有LZ足,有点个人的观点:不知道这两个基因是否在一个基因簇上?如果要同时敲除两个基因,可否试试同时转染两种质粒载 ...

你好,想问一下你敲除用的什么方法转化,原生质体,电转化,还是结合转移,最近也在做放线菌敲除,纠结中
改掉一个旧习惯有多难????
4楼2011-06-27 14:11:28
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syn1985

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

ldy-529(金币+5): 虽然我的金币不多,还是派给你吧! 2011-05-03 18:10:22
我也在进行这方面的研究,不过做的不是真菌而是放线菌,因为工作还未做到那一步所以经验肯定没有LZ足,有点个人的观点:不知道这两个基因是否在一个基因簇上?如果要同时敲除两个基因,可否试试同时转染两种质粒载体呢?
2楼2011-05-03 17:18:20
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zff912

金虫 (小有名气)

楼主  很羡慕你都做到功能验证这步 我是刚开始转化 用的也是农杆菌介导转化的方法  有个问题想请教你  农杆菌放在-20会不会影响其活性  我做的转化一直不稳定 时而好时而坏的 也不知道原因
No matter how far you may fly, never forget where you come from
3楼2011-05-25 17:06:22
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syn1985

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by gumingzhu at 2011-06-27 14:11:28:
你好,想问一下你敲除用的什么方法转化,原生质体,电转化,还是结合转移,最近也在做放线菌敲除,纠结中

我用的是接合转移 选个质粒试一试就知道了 何必纠结
5楼2011-06-27 18:31:00
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