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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 丝状真菌的基因敲除
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ldy-529

银虫 (小有名气)

[求助] 丝状真菌的基因敲除

我最近要敲除掉曲霉里面的两个基因，大概的方案如下：
单独敲除1基因，单独敲除2基因，以及将两个基因都敲除，来研究他们的功能。单独敲除一个基因的载体我都获得了，是通过农杆菌介导转化的，可是不知道如何来进行基因的双敲除载体的构建，不知道真菌里面有没有双交换的概念。有没有做真菌基因敲除的高手啊，真是不慎感激啊！
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1楼 2011-05-03 15:49:04
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gumingzhu

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by syn1985 at 2011-05-03 17:18:20:
我也在进行这方面的研究，不过做的不是真菌而是放线菌，因为工作还未做到那一步所以经验肯定没有LZ足，有点个人的观点：不知道这两个基因是否在一个基因簇上？如果要同时敲除两个基因，可否试试同时转染两种质粒载 ...

你好，想问一下你敲除用的什么方法转化，原生质体，电转化，还是结合转移，最近也在做放线菌敲除，纠结中
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改掉一个旧习惯有多难？？？？
4楼2011-06-27 14:11:28
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syn1985

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

ldy-529(金币+5): 虽然我的金币不多，还是派给你吧！ 2011-05-03 18:10:22
我也在进行这方面的研究，不过做的不是真菌而是放线菌，因为工作还未做到那一步所以经验肯定没有LZ足，有点个人的观点：不知道这两个基因是否在一个基因簇上？如果要同时敲除两个基因，可否试试同时转染两种质粒载体呢？
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2楼2011-05-03 17:18:20
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zff912

金虫 (小有名气)
楼主  很羡慕你都做到功能验证这步 我是刚开始转化 用的也是农杆菌介导转化的方法  有个问题想请教你  农杆菌放在-20会不会影响其活性  我做的转化一直不稳定 时而好时而坏的 也不知道原因
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No matter how far you may fly, never forget where you come from
3楼2011-05-25 17:06:22
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syn1985

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by gumingzhu at 2011-06-27 14:11:28:
你好，想问一下你敲除用的什么方法转化，原生质体，电转化，还是结合转移，最近也在做放线菌敲除，纠结中

我用的是接合转移 选个质粒试一试就知道了 何必纠结
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5楼2011-06-27 18:31:00
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