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js_yangbin

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助】酶的提取缓冲液的问题 已有5人参与

最近看了一些蛋白质提取相关的文献,经常会看到类似于下面的一些描述:取20 g西兰花种子,用液氮研磨成粉末,加60 mL提取缓冲液(O.2 mol/L
Tris—HCI缓冲液,pH7.5,5%甘油,l mmo/L EDTA,3 mmol/L DTT,0.1mmo/L
PMSF)。搅拌均匀后用8层纱布过滤,滤液在4℃下,12000 g离心20 min,收集
上清液作为黑芥子酶租提液
(摘自一篇硕士论文)

其中60 mL提取缓冲液(O.2 mol/L Tris—HCI缓冲液,pH7.5,5%甘油,l mmo/L EDTA,3 mmol/L DTT,0.1mmo/L PMSF)看不明白啊,这个提取液是怎么配制的啊?
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js_yangbin

金虫 (正式写手)

明白了,哈哈,谢谢斑竹
4楼2011-04-14 11:34:37
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js_yangbin

金虫 (正式写手)

求解答
2楼2011-04-14 09:40:30
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reasonspare

木虫 (著名写手)

★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
silicare(金币+5, EPI+1): 专业 2011-04-14 11:42:45
引用回帖:
Originally posted by js_yangbin at 2011-04-14 09:36:36:
最近看了一些蛋白质提取相关的文献,经常会看到类似于下面的一些描述:取20 g西兰花种子,用液氮研磨成粉末,加60 mL提取缓冲液(O.2 mol/L
Tris—HCI缓冲液,pH7.5,5%甘油,l mmo/L EDTA,3 mmol/ ...

问:

其中60 mL提取缓冲液(O.2 mol/L Tris—HCI缓冲液,pH7.5,5%甘油,l mmo/L EDTA,3 mmol/L DTT,0.1mmo/L PMSF)看不明白啊,这个提取液是怎么配制的啊?
如果你配制100ml 提取缓冲液,你知道应该怎么计算用量


将Tris-HCl 配成1M (或者0.5M), 调整pH7.5,灭菌备用
如果你配制100ml 提取缓冲液,你知道应该怎么计算用量

EDTA 配成1M 或者0.1M 备 灭菌用
如果你配制100ml 提取缓冲液,你知道应该怎么计算用量

3 mmol/L DTT,
可配成100mM的母液,分装-20保存
如果你配制100ml 提取缓冲液,你知道应该怎么计算用量

5%甘油,为体积比

0.1mmo/L PMSF, 可以配成母液,也可以直接计算晶体用量
大慈大悲观世音救苦救难观世音有求必应观世音普渡众生观世音千手千眼观世音官大敢管观世音无处不在观世音普观普长观世音南无观世音菩萨
3楼2011-04-14 11:21:43
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silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+2): 欢迎应助! 2011-04-14 19:56:19
PMSF在水中极不稳定,要用异丙醇配好母液,用的时候现用现加

这个配方是最最基础的溶液配置,单位换算问题

建议 你还是从基础学起
5楼2011-04-14 11:45:28
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