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丹朱GOGO

铜虫 (初入文坛)

[求助] 用pH6.5缓冲液和PVPP提取多酚氧化酶，测酶活的时候为什么吸光度随时间逐渐降低呢

用pH6.5缓冲液和PVPP提取苹果中的多酚氧化酶，离心后的液体是橙黄色的，测酶活的时候为什么吸光度随时间逐渐降低呢？望有识之士能帮忙解答下！多谢多谢！
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1楼 2012-11-23 14:38:36
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

slj176

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
丹朱GOGO: 金币+1 2012-12-05 17:17:33
一般有一下几个原因：a、底物或者酶量不足，可以调整底物或者酶的添加量。
                    b、温度和或者缓冲液pH值非最佳。
                    c、其他物质干扰，建议增加离心速度。
希望能帮到你！
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丹朱GOGO
像格瓦拉一样，越是困难越是第一个上！
3楼2012-11-24 13:42:29
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zhouxj

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
丹朱GOGO: 金币+1 2012-12-05 17:17:19
生成的物质是不是不稳定了，超过一定时间就是减少的，减少测定时间，重新设置进程曲线的线性范围
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2楼2012-11-23 23:53:02
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普通回帖

louise1988

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
丹朱GOGO: 金币+1 2012-12-05 17:17:44
测酶活的时候，之前操作有没有在冰上进行啊？可能是部分酶失活了噢……

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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为实验献身了我！！！
4楼2012-11-25 09:50:44
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丹朱GOGO

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by louise1988 at 2012-11-25 09:50:44
测酶活的时候，之前操作有没有在冰上进行啊？可能是部分酶失活了噢……

在4℃提取的酶，紧接着测酶活的
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5楼2012-11-26 15:06:27
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丹朱GOGO

铜虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by slj176 at 2012-11-24 13:42:29
一般有一下几个原因：a、底物或者酶量不足，可以调整底物或者酶的添加量。
                    b、温度和或者缓冲液pH值非最佳。
                    c、其他物质干扰，建议增加离心速度。
希望能帮到你 ...

根据文献，酶、底物、缓冲液各加了1mL，缓冲液pH6.5，我增加离心速度试试
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6楼2012-11-26 15:08:40
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丹朱GOGO

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zhouxj at 2012-11-23 23:53:02
生成的物质是不是不稳定了，超过一定时间就是减少的，减少测定时间，重新设置进程曲线的线性范围

谢谢啊！比色皿中液体最上层是黄色的，下面的颜色浅，第一次遇到这情况，我自己解释不了了
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7楼2012-11-26 15:12:08
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slj176

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
丹朱GOGO: 金币+1 2012-12-05 17:18:05
引用回帖:
6楼: Originally posted by 丹朱GOGO at 2012-11-26 15:08:40
根据文献，酶、底物、缓冲液各加了1mL，缓冲液pH6.5，我增加离心速度试试...

一般需要更换三种溶液的配比
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像格瓦拉一样，越是困难越是第一个上！
8楼2012-11-26 16:14:26
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zhouxj

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by 丹朱GOGO at 2012-11-26 15:12:08
谢谢啊！比色皿中液体最上层是黄色的，下面的颜色浅，第一次遇到这情况，我自己解释不了了...

混匀了没有，现在试管中混匀后再倒入比色皿，最近做的这个实验没有问题，要不先做反应进程曲线确定线性时间
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9楼2012-11-26 21:54:01
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lx11939

木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★
丹朱GOGO: 金币+1 2012-12-05 17:18:17
是不是温度升高了，酶失活了，
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10楼2012-11-27 08:16:27
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