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微生物学实验指导
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附录 2 实验用培养基配制 1．牛肉膏蛋白胨培养基（用于细菌培养） 牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl 5g, 水1000mL, pH7.4～7.6 2. 高氏1号培养基(用于放线菌培养) 可溶性淀粉20g , KNO3 1g, NaCl 0.5g, K2HPO4¬•3H2O 0.5g, MgSO4•7H2O 0.5g, FeSO4•7H2O 0.01g, 水1000mL, pH7.4～7.6。配制时注意，可溶性淀粉要先用冷水调匀后再加入到以上培养基中。 3．马丁氏（Martin）培养基（用于从土壤中分离真菌）K2HPO4 1g, MgSO4•7H2O 0.5g, 蛋白胨5g, 葡萄糖10g, 1/3000孟加拉红水溶液100mL,水900mL, 自然pH, 121℃湿热灭菌30min. 待培养基融化后冷却55～60℃时加入链霉素(链霉素含量为30μg/mL). 4. 马铃薯培养基(PDA)(用于霉菌或酵母菌培养) 马铃薯(去皮)200g, 蔗糖(或葡萄糖) 20g, 水1000mL, 配制方法如下: 将马铃署去皮,切成约2cm2的小块,放入1500mL的烧杯中煮沸30min, 注意用玻棒搅拌以防糊底, 然后用双层纱布过滤, 取其滤液加糖,再补足至1000mL, 自然pH. 霉菌用蔗糖, 酵母菌用葡萄糖. 5. 察氏培养基(蔗糖硝酸钠培养基)(用于霉菌培养) 蔗糖30g, NaNO3 2g, K2HPO4 1g, MgSO4•7H2O 0.5g, KCl 0.5g, FeSO4•7H2O 0.1g, 水1000mL, pH7.0～7.2 6. Hayflik培养基(用于支原体培养) 牛心消化液(或浸出液)1000mL,蛋白胨10g, NaCl 5g, 琼脂15g, pH7.8～8.0, 分装每瓶70mL, 121℃湿热灭菌15min,待冷却至80℃左右,每70mL中加入马血清20mL,25%鲜酵母浸出液10mL, 15醋酸铊水溶液2.5mL, 青霉素G钾盐水溶液(20万单位以上)0.5mL, 以上混合后倾注平板. 注意:醋酸铊是极毒的药品,需特别注意安全操作. 7．麦氏(McCLary)培养基(醋酸钠培养基) 葡萄糖0.1g, KCl 0.18g，酵母膏0.25g，醋酸钠0.82g, 琼脂l.5g，蒸馏水l00mL。溶解后分装试管，1l5℃湿热灭菌15min。 8．葡萄糖蛋白胨水培养基(用于V.P．反应和甲基红试验) 蛋白胨0.5g，葡萄糖0.5g，K2HPO4 0.2g，水100mL, pH7.2, 1l5℃湿热灭菌20min。 9．蛋白胨水培养基(用于吲哚试验) 蛋白胨10g, NaCl 5g, 水1000mL，pH7.2～7.4, 121℃湿热灭菌20min。 10．糖发酵培养基(用于细菌糖发酵试验) 蛋白胨0.2g, NaCl 0.5g, K2HPO4 0.02g，水100mL，溴麝香草酚蓝(1%水溶液) 0.3mL，糖类lg。分别称取蛋白胨和NaCl溶于热水中，调pH至7.4，再加入溴麝香草酚蓝(先用少量95%乙醇溶解后，再加水配成1%水溶液)，加入糖类，分装试管，装量4～5cm高，并倒放入一杜氏小管(管口向下，管内充满培养液)。115℃湿热灭菌20min。灭菌时注意适当延长煮沸时间，尽量把冷空气排尽以使杜氏小管内不残存气泡。常用的糖类，如葡萄糖、蔗糖、甘露糖、麦芽糖、乳糖、半乳糖等(后两种糖的用量常加大为1.5%)。 11. RCM培养基(强化梭菌培养基) (用于厌氧菌培养) 酵母膏3g，牛肉膏l0g，蛋白胨10g，可溶性淀粉lg，葡萄糖5g, 半胱氨酸盐酸盐0.5g，NaCl 3g，NaAc 3g, 水l000mL, pH8.5，刃天青3mg/L, l2l℃湿热灭菌30min。 12. TYA培养基(用于厌氧菌培养) 葡萄糖40g，牛肉膏2g，酵母膏2g，胰蛋白胨(bacto-typetone)6g，醋酸铵3g, KH2PO4 0.5g，MgSO4•7H2O 0.2g，FeSO4•7H2O 0.01g，水1000mL, pH6.5, 121℃湿热灭菌30min。 13．玉米醪培养基(用于厌氧菌培养) 玉米粉65g，自来水1000mL，混匀，煮10min成糊状，自然pH, 121℃湿热灭菌30min。 14．中性红培养基(用于厌氧菌培养) 葡萄糖40g，胰蛋白胨6g，酵母膏2g，牛肉膏2g，醋酸铵3g， KH2PO4 5g，中性红0.2g, MgSO4•7H2O 0.2g，FeSO4•7H2O 0.01g, 水1000ml, pH6.2, 121℃湿热灭菌30min。 15．CaCO3明胶麦芽汁培养基(用于厌氧菌培养) 麦芽汁(6波美)1000mL，水1000mL，CaCO310g, 明胶10g，pH6.8, 121℃湿热灭菌30min。 16．BCG牛乳培养基(用于乳酸发酵)(A)溶液：脱脂乳粉100g，水500mL，加入1.6%溴甲酚绿(B.C.G)乙醇溶液1mL，80℃灭菌20min。(B)溶液：酵母膏10g，水500mL，琼脂20g, pH6.8, 121℃湿热灭菌20min。以无菌操作趁热将(A)、(B)溶液混合均匀后倒平板。 17．乳酸菌培养基(用于乳酸发酵) 牛肉膏5g，酵母膏5g，蛋白胨10g，葡萄糖10g，乳糖5g, NaCl 5g，水1000mL, pH6.8, 121℃湿热灭菌20min。 18．酒精发酵培养基(用于酒精发酵) 蔗糖10g, MgSO4•7H2O 0.5g, NH4NO3 0.5g, 20%豆芽汁2mL, KH2PO4 0.5g，水100mL，自然pH。 19. 柯索夫培养基(用于钩端螺旋体培养) 优质蛋白胨0.4g, NaCl 0.7g, KCl 0.02g, Na HCO3 0.01g，CaCl 0.02g, KH2PO4 0.09g, NaH 2PO4 0.48g, 蒸馏水500 mL，无菌兔血清40mL。制法：除兔血清外的其余各成分混合，加热溶解，调pH至7.2, 121℃湿热灭菌20min，待冷却后，加入无菌兔血清，制成8%血清溶液，然后分装试管（5～10mL/管）, 56℃水浴灭活lh后备用。 20．豆芽汁培养基 黄豆芽500g，加水1000mL，煮沸lh，过滤后补足水分，121℃湿热灭菌后存放备用，此即为50%的豆芽汁， 用于细菌培养：10%豆芽汁200mL，葡萄糖(或蔗糖)50g，水800mL, pH7.2～7.4。 用于霉菌或酵母菌培养：10%豆芽汁200mL，糖50g，水800mL，自然pH。霉菌用蔗糖，酵母菌用葡萄糖。 21．LB(Luria—Bertani) 培养基(细菌培养，常在分子生物学中应用) 双蒸馏水950mL，胰蛋白胨l0g, NaCl l0g，酵母提取物(bacto- yeast extract)5g，用lmol/L NaOH (约l mL) 调节pH值至7.0，加双蒸馏水至总体积为1L，121℃湿热灭菌30min。 含氨苄青霉素LB培养基:待LB培养基灭菌后冷至50℃左右加入抗生素，至终浓度为80～100mg/L。 22．复红亚硫酸钠培养基(远藤氏培养基) (用于水体中大肠菌群测定)蛋白胨10g，牛肉浸膏5g，酵母浸膏5g，琼脂20g，乳糖10g, K2HPO4 0.5g，无水亚硫酸钠5g, 5%碱性复红乙醇溶液20mL，蒸馏水1000mL。 制作过程：先将蛋白胨、牛肉浸膏、酵母浸膏和琼脂加入到900mL水中，加热溶解，再加入K2PO4，溶解后补充水至l000mL，调pH至7.2～7.4。随后加入乳糖，混匀溶解后，于115℃湿热灭菌20min。再称取亚硫酸钠至一无菌空试管中，用少许无菌水使其溶解，在水浴中煮沸10min后，立即滴加于20mL 5%碱性复红乙醇溶液中，直至深红色转变为淡粉红色为止。将此混合液全部加入到上述已灭菌的并仍保持融化状态的培养基中，混匀后立即倒平板，待凝固后存放冰箱备用，若颜色由淡红变为深红，则不能再用。 23．乳糖蛋白胨半固体培养基(用于水体中大肠菌群测定) 蛋白胨10g，牛肉浸膏5g，酵母膏5g，乳糖10g，琼脂5g，蒸馏水1000mL，pH7.2～7.4，分装试管(l0mL/管), 115℃湿热灭菌20min。 24．乳糖蛋白胨培养液(用于多管发酵法检测水体中大肠菌群)蛋白胨10g，牛肉膏3g，乳糖5g，NaCl 5g，蒸馏水l000mL，1.6%溴甲酚紫乙醇溶液lmL。调pH至7.2，分装试管(l0mL/管)，并放入倒置杜氏小管，l15℃湿热灭菌20min。 25．三倍浓乳糖蛋白胨培养液(用于水体中大肠菌群测定)将乳糖蛋白胨培养液中各营养成分以扩大3倍加入到l000mL水中，制法同上，分装于放有倒置杜氏小管的试管中，每管5mL，1l5℃湿热灭菌20min。 26．伊红美蓝培养基(EMB培养基)(用于水体中大肠菌群测定和细菌转导) 蛋白胨l0g, 乳糖10g, K2HPO4 2g，琼脂25g, 2%/伊红Y(曙红)水溶液20mL, 0.5%美蓝(亚甲蓝)水溶液l3mL，pH7.4。制作过程：先将蛋白胨、乳糖、K2HPO4和琼脂混匀，加热溶解后，调pH至7.4, 1l5℃湿热灭菌20min，然后加入已分别灭菌的伊红液和美蓝液，充分混匀，防止产生气泡。待培养基冷却到50℃左右倒平皿。如培养基太热会产生过多的凝集水，可在平板凝固后倒置存于冰箱备用。在细菌转导实验中用半乳糖代替乳糖，其余成分不变。 27．加倍肉汤培养基(用于细菌转导) 牛肉膏6g，蛋白胨20g, NaCL 10g，水1000mL, pH7.4～7.6。 28．半固体素琼脂(用于细菌转导) 琼脂1g，水100mL, 121℃湿热灭菌30min。 29．豆饼斜面培养基(用于产蛋白酶霉菌菌株筛选)：豆饼100g加水5～6倍，煮出滤汁100mL，汁内加入KH2PO4 0.1%, MgSO4 0.05%, (NH4)2SO4 0.05%，可溶性淀粉2%, pH6，琼脂2%～2.5%。 30．酪素培养基(用于蛋白酶菌株筛选) 分别配制A液和B液。 A液：称取Na2HPO4•7H2O 1.07g。干酪素4g，加适量蒸馏水，并加热溶解。 B液：称取 KH2PO4 0.36g，加水溶解。 A、B液混合后，加入酪素水解液0.3 mL, 加琼脂20g，最后用蒸馏水定容至1000mL。 酪素水解液的配制：1g酪蛋白溶于碱性缓冲液中，加入1%的枯草芽孢杆菌蛋白酶25mL加水至100mL, 30℃水解lh。用于配制培养基时，其用量为1000mL培养基中加入100mL以上水解液。 31．细菌基本培养基(用于筛选营养缺陷型) Na2HPO4•7H2O 1g，MgSO4•7H2O 0.2g, 葡萄糖5g, NaCl 5g, K2HPO4 lg，水l000mL, pH7.0, 1l5℃湿热灭菌30min。 32. YEPD培养基(用于酵母原生质体融合) 酵母粉10g, 蛋白胨20g，葡萄糖20g，蒸馏水1000mL, pH6.0，115℃湿热灭菌20min。 33. YEPD高渗培养基(用于酵母原生质体融合) 在YEPD培养基中加入0.6mol/L的NaCL, 3%琼脂。 34. YNB基本培养基(用于酵母原生质体融合) 0.67%酵母氮碱基(YNB, 不含氨基酸，Difco), 2%葡萄糖，3%琼脂，pH6.2。另一配方为：葡萄糖10g (NH4)2SO4 1g，K2HPO4 0.125g，KHPO4 0.875g, KI 0.0001g，MgSO4•7H2O 0.5g, CaCl2•2H2O 0.lg, NaCl0.1g，维量元素母液lmL, 维生素母液lmL(母液均按常规配制)，水1000mL, pH5.8～6.0。 35. YNB高渗基本培养基(用于原生质体融合) 在YNB基本培养基中加入0.6mol/LNaCl。 36．酚红半固体柱状培养基(用于检查氧与菌生长的关系) 蛋白胨1g，葡萄糖10g, 玉米浆10g，琼脂7g, 水1000mL， pH7.2。在调好pH后，加入1.6%酚红溶液数滴，至培养基变为深红色，分装于大试管中，装量约为试管高度的1/2，1l5℃灭菌20min。细菌在此培养基中利用葡萄糖生长产酸，使酚红从红色变成黄色，在不同部位生长的细菌，可使培养基的相应部位颜色改变。但注意培养时间太长，酸可扩散以致不能正确判断结果。 以上各种培养基均可配制成固体或半固体状态，只需改变琼脂用量即可，前者为1.5%～2.0%，后者为0.3%～0.8%。 |
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