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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助 PMSF 缓冲液使用量
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shanghw

银虫 (初入文坛)

[求助] 求助 PMSF 缓冲液使用量

求助各位前辈，PMSF应该怎么配制使用啊？
还有一个问题，麻烦各位帮忙看一下，文献上说先将样品研磨，然后是homigenized with ice-cold N2-purged 100mM  Tris-HCl(pH8.6), 1mM PMSF  and 1%(v:v)Tween 20 at the ratio of 1mL of buffer to 1g tissue FW. 我想问一下各物质具体的量怎么弄啊，是先混合在一块吗？麻烦各位了，不胜感激！
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1楼 2012-10-08 09:58:09
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分子菜鸟

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
shanghw: 金币+3, ★有帮助, 谢谢 2012-10-09 11:46:18
pmsf遇水分解，要先用异丙醇配好，用的时候再加入到体系里。
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2楼2012-10-08 11:33:05
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
各种成分分别配好母液，然后把除PMSF外的几样混好。PMSF是蛋白酶抑制剂，如二楼所说，配在乙醇里，使用前现加。而且PMSF的活性只能保持几个小时，如果你做长时间的分离，要做补充。
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3楼2012-10-08 14:15:58
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mamadexiao

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
shanghw: 金币+2 2012-10-09 11:47:45
这个就是个提蛋白的么
很简单，PMSF是蛋白酶抑制剂
但是它不能直接的融在水里，我们都是拿异丙醇融的，我习惯上配成10mM的，使用的时候，100ul加10ul
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4楼2012-10-08 15:58:20
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beinwen

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用异丙醇配成100*母液，存于-20，用的时候稀释
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5楼2012-10-08 17:13:30
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青豆同学

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
PMSF有毒的，操作时注意。气味也不太好。。。
我们习惯上配制成0•2M母液，不需要研磨，称好了加入乙醇或者甲醇定容后，混匀就行
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shanghw
谢谢你给我信心与力量，我会努力！
6楼2012-10-08 17:57:56
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青豆同学

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

Tris的话，习惯上配制成1M，称好了后，先加部分水，然后等它搅拌均匀了测一下pH，然后加浓盐酸，小心点，一边加一边测pH，差不多了加水补齐体积。具体你这个8•6的需要多少盐酸你可以看看TAKARA的商品目录，上面有介绍。另外这是一个放热反应，Tris对温度敏感，是负相关
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7楼2012-10-08 18:03:03
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shanghw

银虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by 青豆同学 at 2012-10-08 17:57:56
PMSF有毒的，操作时注意。气味也不太好。。。
我们习惯上配制成0•2M母液，不需要研磨，称好了加入乙醇或者甲醇定容后，混匀就行

谢谢啊，我找到配好的PMSF了，100mM的。。谢谢啊
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8楼2012-10-09 11:49:09
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shanghw

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 青豆同学 at 2012-10-08 18:03:03
Tris的话，习惯上配制成1M，称好了后，先加部分水，然后等它搅拌均匀了测一下pH，然后加浓盐酸，小心点，一边加一边测pH，差不多了加水补齐体积。具体你这个8•6的需要多少盐酸你可以看看TAKARA的商品目录，上 ...

谢谢啊
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9楼2012-10-09 11:49:18
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青豆同学

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by shanghw at 2012-10-09 11:49:18
谢谢啊...

不用谢啦
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10楼2012-10-09 12:20:45
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