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shanghw

银虫 (初入文坛)

[求助] 求助 PMSF 缓冲液使用量

求助各位前辈,PMSF应该怎么配制使用啊?
还有一个问题,麻烦各位帮忙看一下,文献上说先将样品研磨,然后是homigenized with ice-cold N2-purged 100mM  Tris-HCl(pH8.6), 1mM PMSF  and 1%(v:v)Tween 20 at the ratio of 1mL of buffer to 1g tissue FW. 我想问一下各物质具体的量怎么弄啊,是先混合在一块吗?麻烦各位了,不胜感激!
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分子菜鸟

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
shanghw: 金币+3, 有帮助, 谢谢 2012-10-09 11:46:18
pmsf遇水分解,要先用异丙醇配好,用的时候再加入到体系里。
2楼2012-10-08 11:33:05
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
各种成分分别配好母液,然后把除PMSF外的几样混好。PMSF是蛋白酶抑制剂,如二楼所说,配在乙醇里,使用前现加。而且PMSF的活性只能保持几个小时,如果你做长时间的分离,要做补充。
3楼2012-10-08 14:15:58
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mamadexiao

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
shanghw: 金币+2 2012-10-09 11:47:45
这个就是个提蛋白的么
很简单,PMSF是蛋白酶抑制剂
但是它不能直接的融在水里,我们都是拿异丙醇融的,我习惯上配成10mM的,使用的时候,100ul加10ul
4楼2012-10-08 15:58:20
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beinwen

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
用异丙醇配成100*母液,存于-20,用的时候稀释
5楼2012-10-08 17:13:30
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青豆同学

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
PMSF有毒的,操作时注意。气味也不太好。。。
我们习惯上配制成0•2M母液,不需要研磨,称好了加入乙醇或者甲醇定容后,混匀就行

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

谢谢你给我信心与力量,我会努力!
6楼2012-10-08 17:57:56
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青豆同学

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

Tris的话,习惯上配制成1M,称好了后,先加部分水,然后等它搅拌均匀了测一下pH,然后加浓盐酸,小心点,一边加一边测pH,差不多了加水补齐体积。具体你这个8•6的需要多少盐酸你可以看看TAKARA的商品目录,上面有介绍。另外这是一个放热反应,Tris对温度敏感,是负相关
谢谢你给我信心与力量,我会努力!
7楼2012-10-08 18:03:03
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shanghw

银虫 (初入文坛)

送鲜花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by 青豆同学 at 2012-10-08 17:57:56
PMSF有毒的,操作时注意。气味也不太好。。。
我们习惯上配制成0•2M母液,不需要研磨,称好了加入乙醇或者甲醇定容后,混匀就行

谢谢啊,我找到配好的PMSF了,100mM的。。谢谢啊
8楼2012-10-09 11:49:09
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shanghw

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 青豆同学 at 2012-10-08 18:03:03
Tris的话,习惯上配制成1M,称好了后,先加部分水,然后等它搅拌均匀了测一下pH,然后加浓盐酸,小心点,一边加一边测pH,差不多了加水补齐体积。具体你这个8•6的需要多少盐酸你可以看看TAKARA的商品目录,上 ...

谢谢啊
9楼2012-10-09 11:49:18
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青豆同学

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
9楼: Originally posted by shanghw at 2012-10-09 11:49:18
谢谢啊...

不用谢啦
谢谢你给我信心与力量,我会努力!
10楼2012-10-09 12:20:45
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