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淬火大螃蟹银虫 (小有名气)
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求助关于磷酸盐缓冲液的配制 已有3人参与
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不是学生物的，想问一下文献中所说的配制PH为3.2、3.6、4.2、4.6、5.0的磷酸氢二钠、柠檬酸、氯化钾缓冲液，离子强度均为0.5M，没有说浓度，请问一般说的多少浓度的缓冲液，这个浓度是指什么呢？是不是一定要知道？ 还有就是，目前找的是只有磷酸氢二钠和柠檬酸的缓冲液配方如下： pH 0.2M Na2HPO4/ml 0.1M柠檬酸/ml 3.2 4.94 15.06 3.6 6.44 13.56 4.2 8.28 11.72 4.6 9.35 10.65 5.0 10.30 9.70 没有说KCl的，请问KCl加进去是不是调节离子强度的？ 是不是说我可以按以上的配方，然后再加KCl调节离子强度？ 问题有点多，希望大侠们指导指导，万分感谢！感激不尽！感激涕零！ |
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淬火大螃蟹(金币+2,VIP+0):谢谢，我想知道的是我该怎么配这个缓冲液 7-13 13:15
淬火大螃蟹(金币+2,VIP+0):谢谢，我想知道的是我该怎么配这个缓冲液 7-13 13:15
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钾盐是用来调节离子强度的，另外还可以用钠盐，原因如下： 磷酸盐是生物化学研究中使用最广泛的一种缓冲剂，由于它们是二级解离，有二个pKa 值，所以用它们配制的缓冲液，pH 范围最宽：NaH2PO4： pKa1＝2.12，pKa2＝7.21； Na2HPO4：pKa1＝7.21，pKa2＝12.32 配酸性缓冲液：用NaH2PO4，pH＝3～4， 配中性缓冲液：用混合的两种磷酸盐，pH＝6～8， 配碱性缓冲液：用Na2HPO4，pH＝10～12。 用钾盐比钠盐好，因为低温时钠盐难溶，钾盐易溶，但若配制SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的缓冲液时，只能用磷酸钠而不能用磷酸钾，因为SDS(十二烷基硫酸钠)会与钾盐生成难溶的十二烷基硫酸钾。 磷酸盐缓冲液的优点为：①容易配制成各种浓度的缓冲液；②适用的pH 范围宽；③pH 受温度的影响小；④缓冲液稀释后pH 变化小，如稀释10倍后pH 的变化小于0.1。 其缺点为：①易与常见的钙Ca2+离子、镁Mg2+离子以及重金属离子缔合生成沉淀；②会抑制某些生物化学过程，如对某些酶的催化作用会产生某种程度的抑制作用. 希望楼主实验顺利  |
3楼2009-07-11 23:04:37
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