应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助 PMSF 缓冲液使用量
141/2返回列表12下一页
查看: 3065  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

shanghw

银虫 (初入文坛)

[求助] 求助 PMSF 缓冲液使用量

求助各位前辈，PMSF应该怎么配制使用啊？
还有一个问题，麻烦各位帮忙看一下，文献上说先将样品研磨，然后是homigenized with ice-cold N2-purged 100mM  Tris-HCl(pH8.6), 1mM PMSF  and 1%(v:v)Tween 20 at the ratio of 1mL of buffer to 1g tissue FW. 我想问一下各物质具体的量怎么弄啊，是先混合在一块吗？麻烦各位了，不胜感激！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-10-08 09:58:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

分子菜鸟

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
shanghw: 金币+3, ★有帮助, 谢谢 2012-10-09 11:46:18
pmsf遇水分解，要先用异丙醇配好，用的时候再加入到体系里。
赞一下 回复此楼
2楼2012-10-08 11:33:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
各种成分分别配好母液，然后把除PMSF外的几样混好。PMSF是蛋白酶抑制剂，如二楼所说，配在乙醇里，使用前现加。而且PMSF的活性只能保持几个小时，如果你做长时间的分离，要做补充。
赞一下 回复此楼
3楼2012-10-08 14:15:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mamadexiao

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
shanghw: 金币+2 2012-10-09 11:47:45
这个就是个提蛋白的么
很简单，PMSF是蛋白酶抑制剂
但是它不能直接的融在水里，我们都是拿异丙醇融的，我习惯上配成10mM的，使用的时候，100ul加10ul
赞一下 回复此楼
4楼2012-10-08 15:58:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

beinwen

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用异丙醇配成100*母液，存于-20，用的时候稀释
赞一下 回复此楼
5楼2012-10-08 17:13:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

青豆同学

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
PMSF有毒的，操作时注意。气味也不太好。。。
我们习惯上配制成0•2M母液，不需要研磨，称好了加入乙醇或者甲醇定容后，混匀就行
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

shanghw
谢谢你给我信心与力量，我会努力！
6楼2012-10-08 17:57:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

青豆同学

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

Tris的话，习惯上配制成1M，称好了后，先加部分水，然后等它搅拌均匀了测一下pH，然后加浓盐酸，小心点，一边加一边测pH，差不多了加水补齐体积。具体你这个8•6的需要多少盐酸你可以看看TAKARA的商品目录，上面有介绍。另外这是一个放热反应，Tris对温度敏感，是负相关
赞一下 回复此楼
谢谢你给我信心与力量，我会努力！
7楼2012-10-08 18:03:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shanghw

银虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by 青豆同学 at 2012-10-08 17:57:56
PMSF有毒的，操作时注意。气味也不太好。。。
我们习惯上配制成0•2M母液，不需要研磨，称好了加入乙醇或者甲醇定容后，混匀就行

谢谢啊，我找到配好的PMSF了，100mM的。。谢谢啊
赞一下 回复此楼
8楼2012-10-09 11:49:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shanghw

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 青豆同学 at 2012-10-08 18:03:03
Tris的话，习惯上配制成1M，称好了后，先加部分水，然后等它搅拌均匀了测一下pH，然后加浓盐酸，小心点，一边加一边测pH，差不多了加水补齐体积。具体你这个8•6的需要多少盐酸你可以看看TAKARA的商品目录，上 ...

谢谢啊
回复此楼
9楼2012-10-09 11:49:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

青豆同学

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by shanghw at 2012-10-09 11:49:18
谢谢啊...

不用谢啦
回复此楼
谢谢你给我信心与力量，我会努力！
10楼2012-10-09 12:20:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 shanghw 的主题更新
141/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 基金不中，共勉 +12 eulota 2026-08-26 12/600 2026-08-31 08:42 by ZJTJZ
[基金申请] 能否申诉？ +6 echo8914667 2026-08-30 7/350 2026-08-31 08:41 by kingkocxr
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的？ +17 爱看书的可乐 2026-08-26 19/950 2026-08-31 08:28 by xiangy672
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +15 晴天加油 2026-08-26 16/800 2026-08-29 18:28 by symmetry
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 2026年叶企孙基金 +4 bud_bud 2026-08-27 7/350 2026-08-29 07:23 by foolishmani
[基金申请] 系统查不到 +11 董八千 2026-08-26 11/550 2026-08-28 18:06 by Leogzhya
[基金申请] 面上合作单位盖章 +5 ssyjh 2026-08-27 5/250 2026-08-27 20:50 by gdfollow
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +5 叶九微 2026-08-26 5/250 2026-08-27 10:35 by l_zh2008
[基金申请] 我不理解！ +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件，有关系吗？ +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 国际合作可查了，中了面上 (EPI+1)(金币+50) +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
[基金申请] 国合现在查不到了吗？ +10 chengyan1220 2026-08-24 20/1000 2026-08-26 08:57 by peasantsprig
[基金申请] 牛来！米来！面来！ +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +9 图啦图啦 2026-08-24 10/500 2026-08-25 11:59 by 南海小哥
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭