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shanghw

银虫 (初入文坛)

[求助] 求助 PMSF 缓冲液使用量

求助各位前辈,PMSF应该怎么配制使用啊?
还有一个问题,麻烦各位帮忙看一下,文献上说先将样品研磨,然后是homigenized with ice-cold N2-purged 100mM  Tris-HCl(pH8.6), 1mM PMSF  and 1%(v:v)Tween 20 at the ratio of 1mL of buffer to 1g tissue FW. 我想问一下各物质具体的量怎么弄啊,是先混合在一块吗?麻烦各位了,不胜感激!
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mamadexiao

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
shanghw: 金币+2 2012-10-09 11:47:45
这个就是个提蛋白的么
很简单,PMSF是蛋白酶抑制剂
但是它不能直接的融在水里,我们都是拿异丙醇融的,我习惯上配成10mM的,使用的时候,100ul加10ul
4楼2012-10-08 15:58:20
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分子菜鸟

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
shanghw: 金币+3, ★有帮助, 谢谢 2012-10-09 11:46:18
pmsf遇水分解,要先用异丙醇配好,用的时候再加入到体系里。
2楼2012-10-08 11:33:05
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
各种成分分别配好母液,然后把除PMSF外的几样混好。PMSF是蛋白酶抑制剂,如二楼所说,配在乙醇里,使用前现加。而且PMSF的活性只能保持几个小时,如果你做长时间的分离,要做补充。
3楼2012-10-08 14:15:58
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beinwen

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
用异丙醇配成100*母液,存于-20,用的时候稀释
5楼2012-10-08 17:13:30
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