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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】为什么用酶最适PH缓冲液提酶酶没有活性？
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springmyqing

铁虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】为什么用酶最适PH缓冲液提酶酶没有活性？ 已有7人参与

本人最近在做酶活测定试验，用PH7.0 Tris-HCL提取酶后在各种PH缓冲液中测酶活，发现在PH5.0时酶活力最大。然后选用PH5.0缓冲液做提取液希望能得到更好的效果，哪知，这样测出的酶没有活力，好纳闷啊？所有其他条件都没有变，最适PH下酶活力不是最大么？酶失活了么？怎么回事呢？
希望各位赐教！谢谢！
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1楼 2010-07-11 22:09:16
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lwiaanngg

铁杆木虫 (著名写手)
你跑过SDS-PAGE了么，确信你在pH5下能纯化出来？
还有，最好能提供更多地信息，例如你测得是那种酶？有一种可能是虽然活性较高，但稳定性在pH5并不好
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2楼2010-07-11 23:47:58
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cqukhk

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
建议重复试验
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7月30日，答应妹子不抽烟，切记，切记
3楼2010-07-12 00:42:12
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看天

木虫 (知名作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by springmyqing at 2010-07-11 22:09:16:
本人最近在做酶活测定试验，用PH7.0 Tris-HCL提取酶后在各种PH缓冲液中测酶活，发现在PH5.0时酶活力最大。然后选用PH5.0缓冲液做提取液希望能得到更好的效果，哪知，这样测出的酶没有活力，好纳闷啊？所有其他条件 ...

是谁告诉你酶提取的时候一定要在最适PH下呢？
我想知道你从哪儿学到的？
最适PH只是用来反应的时候，确保最大速率的时候这样做的。
提取不一定要在最适PH下，你提取的时候干嘛要保证它酶活最大? 这和酶的保存差不多，保存的时候恰恰是要降低活性的
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戒嗔怒以养肝气，省言语以养神气，多读书以养质气，顺时令以养元气，不拘节以养大气，观天变以养灵气，莫强求规于运气。
4楼2010-07-12 07:36:09
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看天

木虫 (知名作家)
不过没有酶活不知是你言重了还是真的 如果是真的 确实有点奇异
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戒嗔怒以养肝气，省言语以养神气，多读书以养质气，顺时令以养元气，不拘节以养大气，观天变以养灵气，莫强求规于运气。
5楼2010-07-12 07:37:08
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haoqian6135

木虫 (正式写手)

蜗牛～
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你是怎么提取的啊？是不是提取过程中需要特定的pH值，pH值的变化致使你的酶不能提出。
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平和悦衲！
6楼2010-07-12 08:59:33
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springmyqing

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by lwiaanngg at 2010-07-11 23:47:58:
你跑过SDS-PAGE了么，确信你在pH5下能纯化出来？
还有，最好能提供更多地信息，例如你测得是那种酶？有一种可能是虽然活性较高，但稳定性在pH5并不好

谢谢回复！
我做的脂肪氧化酶，提取粗酶，只是用了最简单的分离提取，没有纯化。
我是看文献上好多用最适PH提取这个酶的，但是我试了，做不出来。
还有一点，这个酶貌似活力只有1min左右，反应1min后酶活就很小了，文献中也是这样。真的是稳定性不好么？有没有什么检测稳定性的好办法呀？
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7楼2010-07-13 19:04:36
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springmyqing

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by cqukhk at 2010-07-12 00:42:12:
建议重复试验

谢谢，已经重复做过好些次了，都检测不出酶活力来
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8楼2010-07-13 19:05:47
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springmyqing

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 看天 at 2010-07-12 07:36:09:

是谁告诉你酶提取的时候一定要在最适PH下呢？
我想知道你从哪儿学到的？
最适PH只是用来反应的时候，确保最大速率的时候这样做的。
提取不一定要在最适PH下，你提取的时候干嘛要保证它酶活最大? 这和酶的保存 ...

谢谢，我就是看到文献上好些在最适PH下提取的，所以有些纳闷
你说的挺有道理的，貌似是这样子的。本来想优化下条件，使测到的酶活更大些的，好像行不通啊！
我刚刚入门，小卒一个！
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9楼2010-07-13 19:10:10
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springmyqing

铁虫 (小有名气)
★ ★
看天(金币+2):难怪 国内的文献有几篇是真的呀 2010-07-13 19:58:51
引用回帖:
Originally posted by haoqian6135 at 2010-07-12 08:59:33:
你是怎么提取的啊？是不是提取过程中需要特定的pH值，pH值的变化致使你的酶不能提出。

谢谢回复！我的提取就一步，应该不会有影响的吧？而且有文献在此PH提取液下测出酶活的，国内期刊的，难道会是假的？
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10楼2010-07-13 19:13:03
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