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一望晴空

新虫 (初入文坛)

[求助] 为什么我的烟粉虱p450酶没有活性？

我取烟粉虱个体若干，研磨离心两次之后，隔一天再拿到别人的实验室高速离心机10万g离心一个小时，取沉淀微粒体作为酶源，用7-乙氧基香豆素做底物，荧光检测了酶的活性，结果对照和实验组的产物一样多，很郁闷啊。实验过程中酶在25度最多暴露2个小时左右，难道就这么失活了，还是别的方面的问题，请各位大侠帮忙啊，不胜感激。
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1楼 2011-07-19 13:28:00
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viridwind

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
木虫/panda(金币+1): 代楼主给应助者评分 2011-08-21 13:49:18
海报楼那。。一般情况下，测酶活性，尤其像这种的，，都放在冰箱里面啊，，现做现那，，，建议你再试一试
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这社会，累算个球！
2楼2011-07-19 17:24:35
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liuxn0103

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
木虫/panda(金币+1): 代楼主给应助者评分 2011-08-21 13:49:28
这个是不好测定，一定动作快，因为它太容易失活，还有一定要搞清楚制约反应的因素，降低对照的荧光值（也就是本底），这样会做好的。
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Easiersaidthandone
3楼2011-07-20 14:48:59
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343815523

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
木虫/panda(金币+1): 代楼主给应助者评分 2011-08-21 13:49:38
测酶最好是快，提取好后应立即测定活性。而且在提取过程中要注意温度，研磨时温度过高酶就会失活。
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4楼2011-07-23 19:03:56
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myjoe00

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
木虫/panda(金币+1): 代楼主给应助者评分 2011-08-21 13:49:47
这个酶活性不好测，即使跟对照数值不同也不一定就是P450的活性数值
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5楼2011-07-26 17:05:17
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xiuwei001

铁杆木虫 (正式写手)
不知道你研磨离心两次之后，隔一天，这个隔一天怎么保存的？

一般酶活是现提取现测定，而且都在冰浴环境进行以降低酶的分解。

自然界，手，体表等有很多蛋白降解酶，昆虫体内也有各种各样的蛋白降解酶。你提取的一个粗提物什么都有，在这些外源和内源蛋白质降解酶作用下你的粗酶里面的蛋白质肯定也会很快降解的。
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6楼2012-11-11 16:46:54
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liuliqujing

新虫 (初入文坛)
楼主，你好，我想问下你做p450酶的相关问题，能给一下联系方式吗？我的邮箱是guanshero@163.com
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7楼2016-01-12 17:31:56
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