24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 2435  |  回复: 8
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

xtcao668

至尊木虫 (著名写手)


[交流] 【求助/交流】pYES2 载体构建表达方向的问题

最近在做将质粒pYES2 ura3 基因用Nde I 和Nhe I酶切后将G418 基因扩增后连接进行质粒改造, 问题是在设计引物时扩增G418基因上游引物带有NdeI酶切位点,下游带有NheI 酶切位点,如图所示以GAL1启动子为1, 酶切位点NdeI(3700,如图在NheI的右侧),NheI (3840),请问各位虫友这样连接的话是不是外源的G418基因连接方向是反向的,我是否需要重新合成引物调换酶切位点? 谢谢帮忙!


[ Last edited by xtcao668 on 2011-4-13 at 09:02 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

» 抢金币啦!回帖就可以得到:

查看全部散金贴

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cxtcjf

木虫 (正式写手)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by haiyanli111 at 2013-06-17 09:30:00
你好!我也遇到了前面那位的问题,你说的表达元件是什么意思,我构建的时候直接在起始密码子和终止密码子前后加的酶切位点,这样是一个基因吧!谢谢指教!...

基因的启动子、ORF和终止子啊
6楼2013-06-17 21:50:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答
xtcao668(金币+1): 谢谢交流 2011-04-26 15:21:45
引用回帖:
Originally posted by xtcao668 at 2011-04-12 23:44:19:
最近在做将质粒pYES2 ura3 基因用Nde I 和Nhe I酶切后将G418 基因扩增后连接进行质粒改造, 问题是在设计引物时扩增G418基因上游引物带有NdeI酶切位点,下游带有NheI 酶切位点,如图所示以GAL1启动子为1, 酶切位 ...

NdeI(3700)在图上没看到呢 还是我眼浊了?
2楼2011-04-13 00:08:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xtcao668

至尊木虫 (著名写手)


在NheI的右侧,谢谢!图上忘了标注!
3楼2011-04-13 09:03:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
★ ★ ★
xtcao668(金币+2): 谢谢帮忙! 2011-04-13 09:45:45
西瓜(金币+3): good 2011-04-13 10:33:35
xtcao668(金币+1): 谢谢! 2011-04-26 15:22:13
引用回帖:
Originally posted by xtcao668 at 2011-04-13 09:03:52:
在NheI的右侧,谢谢!图上忘了标注!

你扩增G418基因的时候,是应该连带G418基因前面的启动子一起扩增的,是整个表达元件的扩增(仅扩增基因没办法表达哦),竟然是整个表达元件插入到载体,作为一个整体的表达单元在载体上正插入和反插入都能表达的。
PS:你也看到了,质粒图谱箭头都有逆时针方向和顺时针方向同时存在的。
4楼2011-04-13 09:35:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 287求调剂 +6 land xuxu 2026-03-26 6/300 2026-03-26 23:06 by Dyhoer
[考研] 317求调剂 +4 蛋黄咸肉粽 2026-03-26 4/200 2026-03-26 22:38 by Leeding1356
[考研] 08工学调剂 +13 用户573181 2026-03-20 20/1000 2026-03-26 21:22 by 用户573181
[考研] 085701环境工程,267求调剂 +4 minht 2026-03-26 4/200 2026-03-26 20:14 by barlinike
[考研] 生物学学硕,一志愿湖南大学,初试成绩338 +4 YYYYYNNNNN 2026-03-26 4/200 2026-03-26 19:00 by macy2011
[考研] 材料与化工304求B区调剂 +3 邱gl 2026-03-26 6/300 2026-03-26 18:03 by 邱gl
[考研] 调剂推荐 +4 清酒714 2026-03-26 5/250 2026-03-26 17:49 by fmesaito
[考研] 352求调剂 +4 大米饭! 2026-03-22 4/200 2026-03-26 16:40 by 不吃魚的貓
[考研] 一志愿陕师大生物学071000,298分,求调剂 +4 SYA! 2026-03-23 4/200 2026-03-26 15:27 by caiaijun80
[考研] 化学调剂一志愿上海交通大学336分-本科上海211 +4 小鱼爱有机 2026-03-25 4/200 2026-03-26 10:19 by aa331100
[考研] 求调剂 +3 李李不服输 2026-03-25 3/150 2026-03-25 13:03 by cmz0325
[考研] 求调剂323材料与化工 +4 1124361 2026-03-24 4/200 2026-03-25 11:19 by shulmg
[考研] 生物学学硕求调剂 +7 小羊睡着了? 2026-03-23 10/500 2026-03-25 02:24 by 清风拂扬。 m
[考研] 291求调剂 +3 HanBeiNingZC 2026-03-24 3/150 2026-03-24 16:34 by barlinike
[考研] 求调剂 +7 十三加油 2026-03-21 7/350 2026-03-23 23:48 by 热情沙漠
[考研] 341求调剂(一志愿湖南大学070300) +5 番茄头--- 2026-03-22 6/300 2026-03-23 23:45 by Txy@872106
[论文投稿] 急发核心期刊论文 +3 贤达问津 2026-03-23 5/250 2026-03-23 17:13 by 妹子不好惹
[考研] 考研调剂 +3 呼呼?~+123456 2026-03-21 3/150 2026-03-21 20:04 by 无际的草原
[考研] 材料与化工(0856)304求B区调剂 +3 邱gl 2026-03-20 7/350 2026-03-21 19:05 by 15709483992
[考研] 330求调剂0854 +3 assdll 2026-03-21 3/150 2026-03-21 13:01 by 搏击518
信息提示
请填处理意见