应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】pYES2 载体构建表达方向的问题
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
51/1返回列表
查看: 2438  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

xtcao668

至尊木虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】pYES2 载体构建表达方向的问题

最近在做将质粒pYES2 ura3 基因用Nde I 和Nhe I酶切后将G418 基因扩增后连接进行质粒改造， 问题是在设计引物时扩增G418基因上游引物带有NdeI酶切位点，下游带有NheI 酶切位点，如图所示以GAL1启动子为1， 酶切位点NdeI(3700,如图在NheI的右侧)，NheI (3840)，请问各位虫友这样连接的话是不是外源的G418基因连接方向是反向的，我是否需要重新合成引物调换酶切位点？ 谢谢帮忙！


[ Last edited by xtcao668 on 2011-4-13 at 09:02 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2011-04-12 23:44:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cxtcjf

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by haiyanli111 at 2013-06-17 09:30:00
你好！我也遇到了前面那位的问题，你说的表达元件是什么意思，我构建的时候直接在起始密码子和终止密码子前后加的酶切位点，这样是一个基因吧！谢谢指教！...

基因的启动子、ORF和终止子啊
赞一下 回复此楼
6楼2013-06-17 21:50:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

西瓜

荣誉版主 (知名作家)
xtcao668(金币+1): 谢谢交流 2011-04-26 15:21:45
引用回帖:
Originally posted by xtcao668 at 2011-04-12 23:44:19:
最近在做将质粒pYES2 ura3 基因用Nde I 和Nhe I酶切后将G418 基因扩增后连接进行质粒改造， 问题是在设计引物时扩增G418基因上游引物带有NdeI酶切位点，下游带有NheI 酶切位点，如图所示以GAL1启动子为1， 酶切位 ...

NdeI(3700)在图上没看到呢 还是我眼浊了？
赞一下 回复此楼
2楼2011-04-13 00:08:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xtcao668

至尊木虫 (著名写手)
在NheI的右侧，谢谢！图上忘了标注！
赞一下 回复此楼
3楼2011-04-13 09:03:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

susizheng

木虫 (著名写手)
★ ★ ★
xtcao668(金币+2): 谢谢帮忙！ 2011-04-13 09:45:45
西瓜(金币+3): good 2011-04-13 10:33:35
xtcao668(金币+1): 谢谢！ 2011-04-26 15:22:13
引用回帖:
Originally posted by xtcao668 at 2011-04-13 09:03:52:
在NheI的右侧，谢谢！图上忘了标注！

你扩增G418基因的时候，是应该连带G418基因前面的启动子一起扩增的，是整个表达元件的扩增（仅扩增基因没办法表达哦），竟然是整个表达元件插入到载体，作为一个整体的表达单元在载体上正插入和反插入都能表达的。
PS：你也看到了，质粒图谱箭头都有逆时针方向和顺时针方向同时存在的。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-04-13 09:35:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 085701环境工程，267求调剂 +12 minht 2026-03-26 12/600 2026-03-27 22:22 by 无际的草原
[考研] 化学308分求调剂 +8 你好明天你好 2026-03-23 9/450 2026-03-27 14:01 by 杨光于青云
[考研] 求调剂，一志愿 南京航空航天大学大学 ，080500材料科学与工程学硕 +4 @taotao 2026-03-26 5/250 2026-03-27 08:10 by hypershenger
[考研] 304材料求调剂 +4 钟llll 2026-03-26 4/200 2026-03-27 03:42 by wxiongid
[考研] 325求调剂 +3 Aoyijiang 2026-03-23 3/150 2026-03-26 20:46 by 不吃魚的貓
[考研] 【双一流院校新能源、环境材料，材料加工与模拟招收大量调剂】 +4 Higraduate 2026-03-22 8/400 2026-03-26 20:34 by Higraduate
[考研] 289求调剂 +17 硕星赴 2026-03-23 17/850 2026-03-26 16:18 by 不吃魚的貓
[考研] 一志愿中南大学化学学硕0703总分337求调剂 +7 niko- 2026-03-22 7/350 2026-03-25 20:14 by qingfeng258
[考研] 生物技术与工程 +3 1294608413 2026-03-25 4/200 2026-03-25 18:02 by 1294608413
[考研] 284求调剂 +15 Zhao anqi 2026-03-22 15/750 2026-03-25 12:51 by wht0531
[考研] 生物学学硕求调剂 +7 小羊睡着了? 2026-03-23 10/500 2026-03-25 02:24 by 清风拂扬。 m
[考研] 材料专硕找调剂 +5 哈哈哈吼吼吼哈 2026-03-23 5/250 2026-03-24 19:07 by 了了了了。。
[基金申请] 请教下大家 2026年国家基金申请是双盲审吗？ +3 lishucheng1 2026-03-22 5/250 2026-03-24 08:22 by gltch
[考研] 284求调剂 +3 yanzhixue111 2026-03-23 6/300 2026-03-23 22:58 by pswait
[考研] 276求调剂 +3 YNRYG 2026-03-21 4/200 2026-03-23 08:31 by 醉在风里
[考研] 315分，诚求调剂，材料与化工085600 +3 13756423260 2026-03-22 3/150 2026-03-22 20:11 by edmund7
[考研] 求调剂 +5 Zhangbod 2026-03-21 7/350 2026-03-22 13:13 by Zhangbod
[考研] 285求调剂 +6 ytter 2026-03-22 6/300 2026-03-22 12:09 by 星空星月
[考研] 一志愿深大，0703化学，总分302，求调剂 +4 七月-七七 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:20 by 学员8dgXkO
[考研] 求助 +5 梦里的无言 2026-03-21 6/300 2026-03-21 17:51 by 学员8dgXkO
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭