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xtcao668

至尊木虫 (著名写手)

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虫号: 481086

[交流] 【求助/交流】pYES2 载体构建表达方向的问题

最近在做将质粒pYES2 ura3 基因用Nde I 和Nhe I酶切后将G418 基因扩增后连接进行质粒改造，问题是在设计引物时扩增G418基因上游引物带有NdeI酶切位点，下游带有NheI 酶切位点，如图所示以GAL1启动子为1，酶切位点NdeI(3700,如图在NheI的右侧)，NheI (3840)，请问各位虫友这样连接的话是不是外源的G418基因连接方向是反向的，我是否需要重新合成引物调换酶切位点？谢谢帮忙！

[ Last edited by xtcao668 on 2011-4-13 at 09:02 ]

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1楼2011-04-12 23:44:19

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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

xtcao668(金币+1): 谢谢交流 2011-04-26 15:21:45

引用回帖:

Originally posted by xtcao668 at 2011-04-12 23:44:19:
最近在做将质粒pYES2 ura3 基因用Nde I 和Nhe I酶切后将G418 基因扩增后连接进行质粒改造，问题是在设计引物时扩增G418基因上游引物带有NdeI酶切位点，下游带有NheI 酶切位点，如图所示以GAL1启动子为1，酶切位 ...

NdeI(3700)在图上没看到呢