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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】pYES2 载体构建表达方向的问题
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xtcao668

至尊木虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】pYES2 载体构建表达方向的问题

最近在做将质粒pYES2 ura3 基因用Nde I 和Nhe I酶切后将G418 基因扩增后连接进行质粒改造， 问题是在设计引物时扩增G418基因上游引物带有NdeI酶切位点，下游带有NheI 酶切位点，如图所示以GAL1启动子为1， 酶切位点NdeI(3700,如图在NheI的右侧)，NheI (3840)，请问各位虫友这样连接的话是不是外源的G418基因连接方向是反向的，我是否需要重新合成引物调换酶切位点？ 谢谢帮忙！


[ Last edited by xtcao668 on 2011-4-13 at 09:02 ]
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1楼 2011-04-12 23:44:19
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
xtcao668(金币+1): 谢谢交流 2011-04-26 15:21:45
引用回帖:
Originally posted by xtcao668 at 2011-04-12 23:44:19:
最近在做将质粒pYES2 ura3 基因用Nde I 和Nhe I酶切后将G418 基因扩增后连接进行质粒改造， 问题是在设计引物时扩增G418基因上游引物带有NdeI酶切位点，下游带有NheI 酶切位点，如图所示以GAL1启动子为1， 酶切位 ...

NdeI(3700)在图上没看到呢 还是我眼浊了？
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2楼2011-04-13 00:08:11
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