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as023

银虫 (小有名气)

[求助] 求助 很奇怪的载体构建

各位大虾,本人最近在进行实验的最后载体的构建阶段,但是发生了很奇怪的事情,目的片段连上目的载体后,测序没有问题,然后提取质粒,没有问题。但是却抓不进去农杆菌K599,很是奇怪,(感受态是没有问题的),请大家给予解释一下
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武穆大成

木虫 (著名写手)

笨蛋

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
as023: 金币+5 2013-06-25 17:14:13
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-06-26 12:30:04
是不是片段太大?转化是否做了对照,?转化的质粒的量是否够?转化的条件是否正确?可以试试这几方面,祝顺利!
2楼2013-06-25 09:27:10
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as023

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 武穆大成 at 2013-06-25 09:27:10
是不是片段太大?转化是否做了对照,?转化的质粒的量是否够?转化的条件是否正确?可以试试这几方面,祝顺利!

片段不大,对照很好,8ul应该是可以,条件完全ok,但是就是不成功
3楼2013-06-25 17:13:58
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武穆大成

木虫 (著名写手)

笨蛋

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by as023 at 2013-06-25 17:13:58
片段不大,对照很好,8ul应该是可以,条件完全ok,但是就是不成功...

提的质粒的质量如何?有跑胶看结果吗?
4楼2013-06-25 18:49:15
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as023

银虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 武穆大成 at 2013-06-25 18:49:15
提的质粒的质量如何?有跑胶看结果吗?...

还行吧,也挺亮的,就好似转不进去
5楼2013-06-26 09:50:55
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tetsy-wzy

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
as023: 金币+5 2013-10-15 23:38:23
确定下制备农杆菌感受态的时候步骤是不是都正确,因为我之前也做过农杆菌转化,转了好多次就是转不进去,结果步骤出了问题
Thinkingbeforetalk
6楼2013-07-11 19:32:24
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Zeny起航

铁虫 (初入文坛)

我也碰到了和你一样的问题,猜测可能是基因表达了有害物质使农杆菌不能正常生长,在后面换了一个基因的启动子才可以(后面的启动子不能在农杆菌中启动基因)。
7楼2014-05-26 23:46:10
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249830

新虫 (初入文坛)

您好!请问你们的K599菌种能给我点吗!
8楼2015-07-08 00:09:22
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