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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助 很奇怪的载体构建
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as023

银虫 (小有名气)

[求助] 求助 很奇怪的载体构建

各位大虾，本人最近在进行实验的最后载体的构建阶段，但是发生了很奇怪的事情，目的片段连上目的载体后，测序没有问题，然后提取质粒，没有问题。但是却抓不进去农杆菌K599，很是奇怪，（感受态是没有问题的），请大家给予解释一下
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1楼 2013-06-24 23:46:08
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武穆大成

木虫 (著名写手)

笨蛋

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
as023: 金币+5 2013-06-25 17:14:13
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-06-26 12:30:04
是不是片段太大？转化是否做了对照，？转化的质粒的量是否够？转化的条件是否正确？可以试试这几方面，祝顺利！
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2楼2013-06-25 09:27:10
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as023

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 武穆大成 at 2013-06-25 09:27:10
是不是片段太大？转化是否做了对照，？转化的质粒的量是否够？转化的条件是否正确？可以试试这几方面，祝顺利！

片段不大，对照很好，8ul应该是可以，条件完全ok，但是就是不成功
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3楼2013-06-25 17:13:58
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武穆大成

木虫 (著名写手)

笨蛋

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by as023 at 2013-06-25 17:13:58
片段不大，对照很好，8ul应该是可以，条件完全ok，但是就是不成功...

提的质粒的质量如何？有跑胶看结果吗？
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4楼2013-06-25 18:49:15
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as023

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 武穆大成 at 2013-06-25 18:49:15
提的质粒的质量如何？有跑胶看结果吗？...

还行吧，也挺亮的，就好似转不进去
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5楼2013-06-26 09:50:55
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tetsy-wzy

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
as023: 金币+5 2013-10-15 23:38:23
确定下制备农杆菌感受态的时候步骤是不是都正确，因为我之前也做过农杆菌转化，转了好多次就是转不进去，结果步骤出了问题
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Thinkingbeforetalk
6楼2013-07-11 19:32:24
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Zeny起航

铁虫 (初入文坛)
我也碰到了和你一样的问题，猜测可能是基因表达了有害物质使农杆菌不能正常生长，在后面换了一个基因的启动子才可以（后面的启动子不能在农杆菌中启动基因）。
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7楼2014-05-26 23:46:10
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249830

新虫 (初入文坛)
您好！请问你们的K599菌种能给我点吗！
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8楼2015-07-08 00:09:22
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