应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】pYES2 载体构建表达方向的问题
南方科技大学公共卫生及应急管理学院2025级博士研究生招生报考通知
51/1返回列表
查看: 2195  |  回复: 8
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

xtcao668

至尊木虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】pYES2 载体构建表达方向的问题

最近在做将质粒pYES2 ura3 基因用Nde I 和Nhe I酶切后将G418 基因扩增后连接进行质粒改造， 问题是在设计引物时扩增G418基因上游引物带有NdeI酶切位点，下游带有NheI 酶切位点，如图所示以GAL1启动子为1， 酶切位点NdeI(3700,如图在NheI的右侧)，NheI (3840)，请问各位虫友这样连接的话是不是外源的G418基因连接方向是反向的，我是否需要重新合成引物调换酶切位点？ 谢谢帮忙！


[ Last edited by xtcao668 on 2011-4-13 at 09:02 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼2011-04-12 23:44:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

susizheng

木虫 (著名写手)
★ ★ ★
xtcao668(金币+2): 谢谢帮忙！ 2011-04-13 09:45:45
西瓜(金币+3): good 2011-04-13 10:33:35
xtcao668(金币+1): 谢谢！ 2011-04-26 15:22:13
引用回帖:
Originally posted by xtcao668 at 2011-04-13 09:03:52:
在NheI的右侧，谢谢！图上忘了标注！

你扩增G418基因的时候，是应该连带G418基因前面的启动子一起扩增的，是整个表达元件的扩增（仅扩增基因没办法表达哦），竟然是整个表达元件插入到载体，作为一个整体的表达单元在载体上正插入和反插入都能表达的。
PS：你也看到了，质粒图谱箭头都有逆时针方向和顺时针方向同时存在的。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-04-13 09:35:55
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

西瓜

荣誉版主 (知名作家)
xtcao668(金币+1): 谢谢交流 2011-04-26 15:21:45
引用回帖:
Originally posted by xtcao668 at 2011-04-12 23:44:19:
最近在做将质粒pYES2 ura3 基因用Nde I 和Nhe I酶切后将G418 基因扩增后连接进行质粒改造， 问题是在设计引物时扩增G418基因上游引物带有NdeI酶切位点，下游带有NheI 酶切位点，如图所示以GAL1启动子为1， 酶切位 ...

NdeI(3700)在图上没看到呢 还是我眼浊了？
赞一下 回复此楼
2楼2011-04-13 00:08:11
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xtcao668

至尊木虫 (著名写手)
在NheI的右侧，谢谢！图上忘了标注！
赞一下 回复此楼
3楼2011-04-13 09:03:52
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

haiyanli111

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
4楼: Originally posted by susizheng at 2011-04-13 09:35:55
你扩增G418基因的时候，是应该连带G418基因前面的启动子一起扩增的，是整个表达元件的扩增（仅扩增基因没办法表达哦），竟然是整个表达元件插入到载体，作为一个整体的表达单元在载体上正插入和反插入都能表达的 ...

你好！我也遇到了前面那位的问题，你说的表达元件是什么意思，我构建的时候直接在起始密码子和终止密码子前后加的酶切位点，这样是一个基因吧！谢谢指教！
赞一下 回复此楼
5楼2013-06-17 09:30:00
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复(可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭