| 查看: 2199 | 回复: 9 | |||||
| 本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看 | |||||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||||
[交流]
【求助/交流】连接转化 已有8人参与
|
|||||
| 我最近做原核表达，但是目的片段和质粒都双酶切后连接不成功，不知道是什么问题，请各位赐教！ |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 有用的收藏 | 蛋白表达纯化鉴定精华 |
» 猜你喜欢
生物质炭与活化剂氢氧化钾混合注意事项
已经有0人回复
-
科研人必读：新一代 KRAS G12C 抑制剂 Olomorasib 的研究进展
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有187人回复
-
BT-11（Omilancor）研究化合物全解析：从分子结构到实验应用要点
已经有0人回复
-
富马酸贝达喹啉：二芳基喹啉类工具化合物的化学特征
已经有0人回复
-
BT投稿with editor状态快两周了，正常吗
已经有25人回复
-
Silevertinib（BDTX-1535）结构拆解：炔基双环片段为何成为合成瓶颈
已经有0人回复
-
RO4929097 解析：双苯并氮杂䓬骨架与 Notch 通路实验设计要点
已经有0人回复
-
分子量 1157 的 PROTAC 怎么配不析出：SGK3-PROTAC1 的溶解、分装与图谱复核
已经有0人回复
-
logP 6.1 的羧酸怎么配母液：GSK 650394 的溶解窗口与稀释顺序
已经有0人回复
-
从"水不溶"到 71 mg/mL：雷特格韦的 pH 依赖溶解与螯合色谱边界
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 为什么最近做连接转化总是失败
已经有20人回复
- 做酶切连接后转化再提质粒，质粒明显变小，Why???
已经有24人回复
- 请教一下连接与转化问题！
已经有11人回复
- 连接转化不成功问题
已经有17人回复
- BAC文库连接转化
已经有22人回复
- 目的基因连接pGEX-6p-1进行转化的问题
已经有14人回复
- 【求助/交流】目的基因与pPIC9K连接的问题！
已经有9人回复
- 【求助/交流】关于酶切连接转化的问题
已经有10人回复
- 【求助/交流】连接转化时遇到的奇怪问题 求解
已经有12人回复
- 【求助/交流】连接转化长菌有质粒，但是没有目的片段，怎么回事？？
已经有20人回复
- 【求助/交流】请教连接转化方面的问题
已经有14人回复
- 【求助/交流】大片段连接转化成功与否问题
已经有11人回复
- 【求助/交流】长片段的连接转化
已经有9人回复
xiaoyu1014126
木虫 (正式写手)
- 应助: 7 (幼儿园)
- 金币: 2749.4
- 散金: 3353
- 红花: 9
- 帖子: 757
- 在线: 227.8小时
- 虫号: 483157
- 注册: 2007-12-26
- 性别: GG
- 专业: 环境微生物学
4楼2011-04-13 12:23:35
天使托
专家顾问 (职业作家)
T.Shen
-
专家经验: +57 - MolEPI: 106
- 应助: 95 (初中生)
- 贵宾: 0.263
- 金币: 16293.3
- 散金: 593
- 红花: 74
- 沙发: 9
- 帖子: 3661
- 在线: 291小时
- 虫号: 441757
- 注册: 2007-10-27
- 专业: 微生物生理与生物化学
- 管辖: 微生物
2楼2011-04-12 22:23:16
zhaohq1209
铁杆木虫 (著名写手)
- MolEPI: 5
- 应助: 41 (小学生)
- 贵宾: 0.034
- 金币: 10666.7
- 散金: 587
- 红花: 12
- 帖子: 2113
- 在线: 333.7小时
- 虫号: 243823
- 注册: 2006-04-15
- 专业: 病原细菌、细菌感染与宿主
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
西瓜(金币+3): 个人也觉得双酶切出问题可能性比较大 2011-04-12 23:54:35
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
西瓜(金币+3): 个人也觉得双酶切出问题可能性比较大 2011-04-12 23:54:35
3楼2011-04-12 22:23:44
空谷幽风
金虫 (正式写手)
- MolEPI: 32
- 应助: 13 (小学生)
- 贵宾: 0.05
- 金币: 1106.1
- 散金: 500
- 红花: 13
- 帖子: 615
- 在线: 116.5小时
- 虫号: 714271
- 注册: 2009-03-04
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
西瓜(金币+3): 感谢分享 2011-04-14 11:54:42
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
西瓜(金币+3): 感谢分享 2011-04-14 11:54:42
|
1.片段和载体的质量是首先要保证的。片段注意尽量不要有其他条带的污染，尤其是小条带（小条带的连接效率是远远大于大条带的） 2.关于酶切：限制性内切酶对 线性DNA的切割效率要稍低于环状的质粒，因此要适当延长PCR片段的酶切时间；还有PCR产物两端的酶切位点前有没有加足够的保护碱基，裸露的酶切位点是无法酶切的；在进行双酶切时，载体上如果两个酶切位点离得比较近(即切完后无法通过跑胶看到切下的小片段)建议不要进行一步双酶切，而是要分步酶切，这样比较保险；酶切完后PCR片段可以直接过柱回收，质粒最好割胶回收。 3.关于连接：只要控制好片段载体的比例，抗性弄不错的话按操作规程来是不会出现什么问题的 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
yu棒棒5楼2011-04-13 13:31:39
