应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 【求助/交流】土壤总DNA的离心柱纯化问题
161/1返回列表
查看: 3366  |  回复: 15
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MicEPI ，点击这里进行查看

camel315

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】土壤总DNA的离心柱纯化问题

目前我在手工提取土壤总DNA的时候，需要用离心柱纯化DNA。DNA粗提液的OD260含量比较低，但230nm的杂质较多。我用Mobio公司的试剂盒就不存在这个问题，他们的离心柱的材质可能比较好，可以有效除去粗提液中的各种杂质。国内商用的纯化试剂盒一般只对PCR产物（或者说片段<10kb)的核酸比较有效，而对基因组DNA的纯化效率比较低(<50%,甚至<30%).各位虫友，有谁用过成熟的（硅胶或者树脂）离心柱，可以有效除杂（主要是腐殖酸和盐类）？不妨给点建议。
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

土壤微生物

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2011-04-11 11:13:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mirror3895

铁杆木虫 (正式写手)
camel315(金币+1): 2011-07-07 09:39:32
我也想知道这个问题呢，期待高人的解答
赞一下 回复此楼
2楼2011-04-11 11:20:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天使托

专家顾问 (职业作家)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
wolfebst(金币+1): 谢谢您的参与 2011-04-11 12:24:39
camel315(金币+1): 2011-05-30 09:26:33
camel315(金币+1): 2011-07-07 09:39:19
你看看bioteke的这个多功能DNA试剂盒可以不？
http://www.bioteke.com/chn/showproduct.asp?id=176
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2011-04-11 11:49:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

camel315

金虫 (小有名气)
bioteke的试剂盒我问了，50次的1500元，价格还是非常高的，而且不提供试用装。跟mobio的power soil DNA isolation kit差不多了。其实是基于zhou（1996）方法，加入了离心柱除杂步骤。但是他的离心柱不单卖。
赞一下 回复此楼
4楼2011-04-11 16:23:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

camel315

金虫 (小有名气)
其实这个东西对有机分析的人员来说，应该不是什么太难的问题。只是没人或者没有动力去弄这个。
赞一下 回复此楼
5楼2011-04-11 16:24:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qyunpeng

铁杆木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
camel315(金币+1): 2011-05-30 09:27:05
camel315(金币+1): 2011-07-07 09:38:30
引用回帖:
Originally posted by camel315 at 2011-04-11 11:13:23:
目前我在手工提取土壤总DNA的时候，需要用离心柱纯化DNA。DNA粗提液的OD260含量比较低，但230nm的杂质较多。我用Mobio公司的试剂盒就不存在这个问题，他们的离心柱的材质可能比较好，可以有效除去粗提液中的各种杂 ...

专门用来去除腐殖酸的柱子好像不多
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2011-04-11 21:13:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

camel315

金虫 (小有名气)
不知哪位虫友知道，现在试剂盒中用到的硅胶膜的孔径或者颗粒是多大的？
赞一下 回复此楼
7楼2011-04-19 10:24:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
scelab(金币+5, EPI+1): 谢谢热心回复~ 2011-04-20 23:00:11
camel315(金币+2): 2011-05-30 09:26:54
如果不偷懒，可以用两天时间获得无腐殖酸无盐的DNA。

堆肥中提取得到的腐殖酸比平常花园土之类的高几十倍，但腐殖酸一样能除去。腐殖酸的分子量很大，（ http://wenku.baidu.com/view/dad59a274b35eefdc8d33303.html    http://cdmd.cnki.com.cn/Article/CDMD-10141-2006067999.htm ）只要过凝胶层析柱就能除去腐殖酸，脱盐也简单，用多几次70%乙醇洗就行。

可以看看庞浩的博士论文，文件太大传不上来。
利用宏基因组技术克隆和鉴定堆肥环境中的纤维素酶基因
http://d.g.wanfangdata.com.cn/Thesis_Y1600277.aspx

[ Last edited by 冼亮淀粉酶 on 2011-4-19 at 14:37 ]
赞一下(2人) 回复此楼
8楼2011-04-19 14:32:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

camel315

金虫 (小有名气)
谢谢热心人提供的信息
赞一下 回复此楼
9楼2011-04-26 10:15:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yabing0324

金虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
camel315(金币+1): 2011-07-07 09:38:57
我怎么用MOBIO的也提不出来，愁死了
赞一下(2人) 回复此楼
10楼2011-07-05 10:28:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

camel315

金虫 (小有名气)
Mobio对腐殖土还是很对症的。也许你的样品中的微生物数量本来就少。如果是这样，可以考虑富集。同时考虑在提取前，60~65℃水域处理10分钟，提高裂解效率。
赞一下 回复此楼
11楼2011-07-06 09:22:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mirror3895

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
好像上海生工有种试剂，是用来清除提取的DNA中的腐殖质的，但是没用过，不知道有没有人试过呢？
赞一下(1人) 回复此楼
12楼2011-07-08 10:41:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

isunflower

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
我用的也是MOBIO，效果很不好，肿么办？
赞一下(1人) 回复此楼
13楼2011-07-22 11:18:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

camel315

金虫 (小有名气)
mobio有UltroClean和Power Soil DNA之分，后者对腐殖酸效果好。前者不是专门针对高腐殖酸土壤的。其次，它有一个troubleshooting，可以从上面找到一些解决的方法。
赞一下 回复此楼
14楼2011-07-24 09:53:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lethebai

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
1189957楼: Originally posted by yabing0324 at 2011-07-05 10:28:57
我怎么用MOBIO的也提不出来，愁死了

我也是啊 而且总会有浓度纯度都对就是电泳没条带，你有这种情况吗？
赞一下 回复此楼
15楼2012-11-19 17:35:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiangchou812

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
15楼: Originally posted by lethebai at 2012-11-19 17:35:26
我也是啊 而且总会有浓度纯度都对就是电泳没条带，你有这种情况吗？...

我也遇到这种情况了呀，浓度30ng/vl，OD260/280也挺好，但就是260/230只有1.2左右，同样扩增不到条带。
赞一下 回复此楼
16楼2014-05-05 09:12:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 camel315 的主题更新
161/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿211，0703化学305分求调剂 +26 严西西戏 2026-04-06 33/1650 2026-04-11 23:01 by 314126402
[考研] 电子信息270求调剂 +14 terminal469 2026-04-07 14/700 2026-04-11 19:44 by laoshidan
[考研] 求调剂，一志愿大连理工大学354分 +5 雨声余生 2026-04-11 6/300 2026-04-11 16:12 by 雨声余生
[考研] 316求调剂 +4 想读研究生( ?∵ 2026-04-07 4/200 2026-04-11 11:43 by zhq0425
[考研] 269电子信息求调剂，可转专业 +11 独酌wl 2026-04-06 11/550 2026-04-11 11:12 by 逆水乘风
[考研] 生物学调剂 +8 小冉要努力 2026-04-10 9/450 2026-04-11 10:22 by wwj2530616
[考研] 297求调剂 +9 Kwgyz 2026-04-09 9/450 2026-04-11 10:09 by zhq0425
[考研] 求调剂 +13 雪逢冬 2026-04-10 13/650 2026-04-11 09:58 by 猪会飞
[考研] 中药学调剂 初试324 +4 洋甘菊、 2026-04-10 6/300 2026-04-11 09:41 by gong120082
[考研] 生物学308求调剂（一志愿华东师大） +6 相信必会光芒万� 2026-04-10 6/300 2026-04-11 05:23 by zhuwenxu
[考研] 368求调剂 +3 17385968172 2026-04-10 3/150 2026-04-10 20:12 by 电子奥德彪
[考研] 282，电气工程专业，求调剂，不挑专业 +9 jggshjkkm 2026-04-10 9/450 2026-04-10 14:55 by 逆水乘风
[考研] 本科西工大 0856 324求调剂 +10 wysyjs25 2026-04-09 11/550 2026-04-10 08:37 by 5268321
[考研] 085601初试330分找调剂 +10 流心奶黄包l 2026-04-09 10/500 2026-04-10 08:14 by Sammy2
[考研] 本科郑州大学，一志愿华东师范大学282求调剂 +23 熊哥xtk 2026-04-07 26/1300 2026-04-09 17:17 by 18446523
[考研] 085600材料与化工专硕329 求调剂 +24 额cc 2026-04-06 25/1250 2026-04-09 16:01 by wp06
[考研] 一志愿985初试354分生物调剂 +3 031001 2026-04-06 3/150 2026-04-09 00:30 by Evan_Liu
[考研] 353求调剂 +8 晴空万里air 2026-04-07 8/400 2026-04-09 00:18 by GouQ
[考研] 331求调剂 +5 luoxin0706. 2026-04-08 5/250 2026-04-08 22:15 by zhouyuwinner
[考研] 0854电子信息319求调剂（接受跨专业调剂） +5 星星不眨眼喽 2026-04-05 6/300 2026-04-07 22:16 by hemengdong
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭