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camel315

金虫 (小有名气)

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[交流] 【求助/交流】土壤总DNA的离心柱纯化问题

目前我在手工提取土壤总DNA的时候，需要用离心柱纯化DNA。DNA粗提液的OD260含量比较低，但230nm的杂质较多。我用Mobio公司的试剂盒就不存在这个问题，他们的离心柱的材质可能比较好，可以有效除去粗提液中的各种杂质。国内商用的纯化试剂盒一般只对PCR产物（或者说片段<10kb)的核酸比较有效，而对基因组DNA的纯化效率比较低(<50%,甚至<30%).各位虫友，有谁用过成熟的（硅胶或者树脂）离心柱，可以有效除杂（主要是腐殖酸和盐类）？不妨给点建议。

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1楼 2011-04-11 11:13:23

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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
scelab(金币+5, EPI+1): 谢谢热心回复~ 2011-04-20 23:00:11
camel315(金币+2): 2011-05-30 09:26:54

如果不偷懒，可以用两天时间获得无腐殖酸无盐的DNA。

堆肥中提取得到的腐殖酸比平常花园土之类的高几十倍，但腐殖酸一样能除去。腐殖酸的分子量很大，（ http://wenku.baidu.com/view/dad59a274b35eefdc8d33303.html http://cdmd.cnki.com.cn/Article/CDMD-10141-2006067999.htm ）只要过凝胶层析柱就能除去腐殖酸，脱盐也简单，用多几次70%乙醇洗就行。

可以看看庞浩的博士论文，文件太大传不上来。
利用宏基因组技术克隆和鉴定堆肥环境中的纤维素酶基因
http://d.g.wanfangdata.com.cn/Thesis_Y1600277.aspx

[ Last edited by 冼亮淀粉酶 on 2011-4-19 at 14:37 ]

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