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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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夏尔list

金虫 (著名写手)


[交流] 【求助/交流】PCR一个月了没啥结果

ddH2O                           15.5
5×Buffer                            5
10毫摩尔引物                0.5/0.5
2.5mMdNTP                        2
cDNA                                  1
高保真酶prime STAR           0.5

产物1314bp,98℃     5min
                       98℃     10s
                       58℃     15s
                       72℃     1min30s   30个循环
                       4℃       hold
梯度设置了,58没错,普通taq酶有条带,但是高保真酶扩不出来,求教各位大侠。
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夏尔list

金虫 (著名写手)


引用回帖:
Originally posted by wufengjian at 2011-03-26 23:42:28:
楼主用的是cDNA啊。那样的话P不出很正常的。提RNA的原因,反转录的原因,甚至该基因有无表达,都可能是原因。

嗯,我用的是师姐的 cDNA,她说用actin扩过可以的,差不多大半年了,我今天又用actin扩了结果没有扩出来。我准备重新提RNA反转了,谢谢各位
7楼2011-03-27 00:07:43
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阿修罗Axuro

金虫 (小有名气)



夏尔list(金币+1):谢谢参与
楼主目的带多长?
2楼2011-03-26 15:39:12
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★ ★ ★ ★
夏尔list(金币+1):谢谢参与
看天(金币+3): 鼓励 2011-03-27 09:16:43
这么久,变通一下啊。。。

既然taq能扩出来那就用taq扩增, 然后连载体送去测序。

如果不幸发生了点突变,那再设计引物突变回来就OK了。

不管用什么方法,做出来就是王道。。。

PS:下次再看到你的发帖我就不进来了,我对你的头像过敏。。。有点慎得慌

[ Last edited by brightfuture01 on 2011-3-26 at 15:51 ]
3楼2011-03-26 15:48:27
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地图蜗牛

银虫 (小有名气)



夏尔list(金币+1):谢谢参与
引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2011-03-26 15:48:27:
这么久,变通一下啊。。。

既然taq能扩出来那就用taq扩增, 然后连载体送去测序。

如果不幸发生了点突变,那再设计引物突变回来就OK了。

不管用什么方法,做出来就是王道。。。

PS:下次再看到 ...

同意,就用普通Taq酶,突变也不是那么容易就发生的。
4楼2011-03-26 23:03:49
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