24小时热门版块排行榜    

查看: 1671  |  回复: 13

wuzunfeng416

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】土壤真菌PCR 已有6人参与

最近再批土壤真菌,没条带,望大家提提建议,用的引物是NS1F和NS8R
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

allica

新虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
条带不好原因挺多的,首先检查你的基因组DNA质量。然后就是你的PCR模板量和PCR程序调整。可以做个退火温度梯度的实验。
2楼2011-03-15 15:41:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

精精

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by wuzunfeng416 at 2011-03-15 14:08:23:
最近再批土壤真菌,没条带,望大家提提建议,用的引物是NS1F和NS8R

用这对引物扩真菌好像问题是挺多的,但是好像好是能够扩出来的,再尝试试试~~
少才微善
3楼2011-03-17 16:49:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

syw2005

铁杆木虫 (小有名气)

我用的ITS1和ITS4,第一次能扩出来,后来再也扩不出来,不知为何?试了好多条件都不行?难,我从模板、引物、酶都摸了,还是不行。不过有一些可以定下来,模板有抑制物。多试才有经验。
新疆胡杨
4楼2011-08-01 22:10:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jinkui960

至尊木虫 (知名作家)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
4楼: Originally posted by syw2005 at 2011-08-01 22:10:48:
我用的ITS1和ITS4,第一次能扩出来,后来再也扩不出来,不知为何?试了好多条件都不行?难,我从模板、引物、酶都摸了,还是不行。不过有一些可以定下来,模板有抑制物。多试才有经验。

我觉得可能是模板的问题,如果模板有抑制物的话,可以稀释看看,祝好运!
5楼2011-08-02 09:12:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bear0329

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
我提的土壤DNA,细菌的16sDNA可以很好的扩增出来,带很亮。但是真菌的ITS序列就是很淡,体系和条件都优化了,都不行哦,还是很淡。纠结中,还请高手指点。我用的是ITS1/ITS4这对引物。谢谢啦
以马内利!
6楼2011-08-03 10:07:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biocontrol

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
换个引物看看,NS1和fungi扩增效果还可以。ITS1和4扩增不行的可以换成它
裸奔进行时...
7楼2011-08-03 11:05:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hc1027

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
6楼: Originally posted by bear0329 at 2011-08-03 10:07:31:
我提的土壤DNA,细菌的16sDNA可以很好的扩增出来,带很亮。但是真菌的ITS序列就是很淡,体系和条件都优化了,都不行哦,还是很淡。纠结中,还请高手指点。我用的是ITS1/ITS4这对引物。谢谢啦

请问你是用的什么方法提的土壤DNA呢?AEM的那篇蛋白酶K+CTAB法吗?
8楼2011-08-04 15:27:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bear0329

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
8楼: Originally posted by hc1027 at 2011-08-04 15:27:54:
请问你是用的什么方法提的土壤DNA呢?AEM的那篇蛋白酶K+CTAB法吗?

恩啊,DNA还是很好提的
以马内利!
9楼2011-08-04 16:35:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hc1027

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
9楼: Originally posted by bear0329 at 2011-08-04 16:35:55:
恩啊,DNA还是很好提的

我也提了好几次,效果总是不好,有时根本提不出来。
想请教下细节方面,希望指点:
1、加氯仿异戊醇后混匀是涡旋还是轻轻颠倒混匀,涡旋会使DNA断裂吗?离心速度和时间是多少?
2、70%乙醇洗沉淀如何进行?是直接加到沉淀中后马上就倒掉,还是加了之后轻轻混合然后离心再吸走上清液,离心速度及时间是多少?
3、洗沉淀后一般如何干燥?发现我的样经常风干10多分钟也没见干,请问你是怎么做的呢?
4、用TE或者ddH2O溶解DNA的问题:是直接加进去放置一会就行了,还是要50度左右水浴下呢?还是4度放置过夜之类的?
O(∩_∩)O谢谢
10楼2011-08-04 21:21:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 wuzunfeng416 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0703化学调剂 290分有科研经历,论文在投 +7 腻腻gk 2026-03-14 7/350 2026-03-16 10:12 by houyaoxu
[考研] 调剂 +8 调剂的考研学生 2026-03-09 8/400 2026-03-15 22:14 by Winj1e
[考研] 中科院材料273求调剂 +3 yzydy 2026-03-15 3/150 2026-03-15 21:15 by ms629
[考研] 297求调剂 +4 学海漂泊 2026-03-13 4/200 2026-03-14 11:51 by 热情沙漠
[考研] 材料080500调剂求收留 +3 一颗meteor 2026-03-13 3/150 2026-03-14 10:54 by peike
[考研] 云南财经大学信息学院计算机学硕专硕学位点 +3 zjptai 2026-03-10 5/250 2026-03-14 01:23 by 飞行琦
[考研] 求调剂 +6 yfihxh 2026-03-09 6/300 2026-03-14 01:18 by JourneyLucky
[考研] 一志愿安徽大学材料工程专硕313分,求调剂的学校 +8 Yu先生 2026-03-10 10/500 2026-03-14 01:04 by JourneyLucky
[考研] 材料与化工304求B区调剂 +5 邱gl 2026-03-11 6/300 2026-03-13 22:37 by JourneyLucky
[考研] 307求调剂 +5 超级伊昂大王 2026-03-12 5/250 2026-03-13 15:56 by 棒棒球手
[考研] 一志愿211化学学硕310分求调剂 +8 努力奋斗112 2026-03-12 9/450 2026-03-13 15:41 by JourneyLucky
[考研] 314求调剂 +7 无懈可击的巨人 2026-03-12 7/350 2026-03-13 15:40 by JourneyLucky
[考研] 工科调剂 +4 Jiang191123! 2026-03-11 4/200 2026-03-13 15:15 by Miko19
[考研] 277求调剂 +4 anchor17 2026-03-12 4/200 2026-03-13 11:15 by 白夜悠长
[考研] 材料专硕274一志愿陕西师范大学求调剂 +4 薛云鹏 2026-03-13 4/200 2026-03-13 10:40 by 学员8dgXkO
[考研] 求调剂 资源与环境 285 +3 未名考生 2026-03-10 3/150 2026-03-13 10:31 by houyaoxu
[考研] 270求调剂 085600材料与化工专硕 +3 YXCT 2026-03-11 3/150 2026-03-13 10:13 by houyaoxu
[考博] 福州大学杨黄浩课题组招收2026年专业学位博士研究生,2026.03.20截止 +3 Xiangyu_ou 2026-03-12 3/150 2026-03-13 09:36 by duanwu655
[考博] 26读博 +4 Rui135246 2026-03-12 10/500 2026-03-13 07:15 by gaobiao
[考博] 2026年博士申请 +3 QwQwQW10 2026-03-11 3/150 2026-03-12 17:58 by gxch43
信息提示
请填处理意见