24小时热门版块排行榜    

查看: 1672  |  回复: 13

wuzunfeng416

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】土壤真菌PCR 已有6人参与

最近再批土壤真菌,没条带,望大家提提建议,用的引物是NS1F和NS8R
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

allica

新虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
条带不好原因挺多的,首先检查你的基因组DNA质量。然后就是你的PCR模板量和PCR程序调整。可以做个退火温度梯度的实验。
2楼2011-03-15 15:41:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

精精

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by wuzunfeng416 at 2011-03-15 14:08:23:
最近再批土壤真菌,没条带,望大家提提建议,用的引物是NS1F和NS8R

用这对引物扩真菌好像问题是挺多的,但是好像好是能够扩出来的,再尝试试试~~
少才微善
3楼2011-03-17 16:49:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

syw2005

铁杆木虫 (小有名气)

我用的ITS1和ITS4,第一次能扩出来,后来再也扩不出来,不知为何?试了好多条件都不行?难,我从模板、引物、酶都摸了,还是不行。不过有一些可以定下来,模板有抑制物。多试才有经验。
新疆胡杨
4楼2011-08-01 22:10:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jinkui960

至尊木虫 (知名作家)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
4楼: Originally posted by syw2005 at 2011-08-01 22:10:48:
我用的ITS1和ITS4,第一次能扩出来,后来再也扩不出来,不知为何?试了好多条件都不行?难,我从模板、引物、酶都摸了,还是不行。不过有一些可以定下来,模板有抑制物。多试才有经验。

我觉得可能是模板的问题,如果模板有抑制物的话,可以稀释看看,祝好运!
5楼2011-08-02 09:12:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bear0329

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
我提的土壤DNA,细菌的16sDNA可以很好的扩增出来,带很亮。但是真菌的ITS序列就是很淡,体系和条件都优化了,都不行哦,还是很淡。纠结中,还请高手指点。我用的是ITS1/ITS4这对引物。谢谢啦
以马内利!
6楼2011-08-03 10:07:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biocontrol

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
换个引物看看,NS1和fungi扩增效果还可以。ITS1和4扩增不行的可以换成它
裸奔进行时...
7楼2011-08-03 11:05:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hc1027

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
6楼: Originally posted by bear0329 at 2011-08-03 10:07:31:
我提的土壤DNA,细菌的16sDNA可以很好的扩增出来,带很亮。但是真菌的ITS序列就是很淡,体系和条件都优化了,都不行哦,还是很淡。纠结中,还请高手指点。我用的是ITS1/ITS4这对引物。谢谢啦

请问你是用的什么方法提的土壤DNA呢?AEM的那篇蛋白酶K+CTAB法吗?
8楼2011-08-04 15:27:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bear0329

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
8楼: Originally posted by hc1027 at 2011-08-04 15:27:54:
请问你是用的什么方法提的土壤DNA呢?AEM的那篇蛋白酶K+CTAB法吗?

恩啊,DNA还是很好提的
以马内利!
9楼2011-08-04 16:35:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hc1027

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
9楼: Originally posted by bear0329 at 2011-08-04 16:35:55:
恩啊,DNA还是很好提的

我也提了好几次,效果总是不好,有时根本提不出来。
想请教下细节方面,希望指点:
1、加氯仿异戊醇后混匀是涡旋还是轻轻颠倒混匀,涡旋会使DNA断裂吗?离心速度和时间是多少?
2、70%乙醇洗沉淀如何进行?是直接加到沉淀中后马上就倒掉,还是加了之后轻轻混合然后离心再吸走上清液,离心速度及时间是多少?
3、洗沉淀后一般如何干燥?发现我的样经常风干10多分钟也没见干,请问你是怎么做的呢?
4、用TE或者ddH2O溶解DNA的问题:是直接加进去放置一会就行了,还是要50度左右水浴下呢?还是4度放置过夜之类的?
O(∩_∩)O谢谢
10楼2011-08-04 21:21:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 wuzunfeng416 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 327求调剂 +6 拾光任染 2026-03-15 11/550 2026-03-15 22:47 by 拾光任染
[考研] 289求调剂 +4 这么名字咋样 2026-03-14 6/300 2026-03-14 18:58 by userper
[考研] 求调剂 +3 清风问长安 2026-03-09 3/150 2026-03-14 02:15 by JourneyLucky
[考研] 一志愿安徽大学材料工程专硕313分,求调剂的学校 +8 Yu先生 2026-03-10 10/500 2026-03-14 01:04 by JourneyLucky
[基金申请] 有必要更换申报口吗 20+3 fannyamoy 2026-03-11 3/150 2026-03-14 00:52 by zhanghaozhu
[考研] 材料与化工(0856)304求B区调剂 +6 邱gl 2026-03-12 7/350 2026-03-13 23:24 by 邱gl
[考研] 材料工程调剂 +9 咪咪空空 2026-03-12 9/450 2026-03-13 22:05 by 星空星月
[考研] 26调剂/材料/英一数二/总分289/已过A区线 +6 步川酷紫123 2026-03-13 6/300 2026-03-13 21:59 by 星空星月
[考研] (081700)化学工程与技术-298分求调剂 +12 11啦啦啦 2026-03-11 35/1750 2026-03-13 21:25 by JourneyLucky
[考研] 293求调剂 +3 世界首富 2026-03-11 3/150 2026-03-13 16:27 by JourneyLucky
[考研] 302求调剂 +6 负心者当诛 2026-03-11 6/300 2026-03-13 16:11 by JourneyLucky
[考研] 工科材料085601 279求调剂 +8 困于星晨 2026-03-12 10/500 2026-03-13 15:42 by ms629
[考研] 290求调剂 +7 ADT 2026-03-12 7/350 2026-03-13 15:17 by JourneyLucky
[考研] 0817化学工程与技术考研312分调剂 +3 T123 tt 2026-03-12 3/150 2026-03-13 10:49 by houyaoxu
[考研] 282分材料专业求调剂院校 +18 枫桥ZL 2026-03-09 25/1250 2026-03-13 10:47 by 白夜悠长
[考研] 283求调剂,材料、化工皆可 +8 苏打水7777 2026-03-11 10/500 2026-03-13 09:06 by Linda Hu
[考博] 读博申请 +5 感dd 2026-03-10 7/350 2026-03-11 17:02 by QGZDSYS
[考研] 哈工大材料324求调剂 +6 闫旭东 2026-03-10 8/400 2026-03-10 22:49 by 星空星月
[考研] 298求调剂 +3 Vv呀! 2026-03-10 3/150 2026-03-10 22:40 by 剑诗杜康
[考研] 一志愿:武汉理工,材料工程,英二数二 总分314 +3 2202020125 2026-03-10 4/200 2026-03-10 13:54 by xiongyaxuan
信息提示
请填处理意见