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bear0329

金虫 (正式写手)
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10楼: Originally posted by hc1027 at 2011-08-04 21:21:34:
我也提了好几次，效果总是不好，有时根本提不出来。
想请教下细节方面，希望指点：
1、加氯仿异戊醇后混匀是涡旋还是轻轻颠倒混匀，涡旋会使DNA断裂吗？离心速度和时间是多少？
2、70%乙醇洗沉淀如何进行？是 ...

1.加氯仿异戊醇时都要缓慢，颠倒混匀即可，13000rpm 10min
2.洗完沉淀后，13000rpm 10min，去上清
3.离心管倒扣在吸水纸上，然后可以用移液枪小心把多余残留的酒精吸掉，在无菌操作台上吹干或者打开盖子在4℃冰箱过夜即可
4.最后用无菌超纯水溶解即可
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以马内利！
11楼2011-08-04 22:15:18
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hc1027

木虫 (正式写手)
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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
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11楼: Originally posted by bear0329 at 2011-08-04 22:15:18:
1.加氯仿异戊醇时都要缓慢，颠倒混匀即可，13000rpm 10min
2.洗完沉淀后，13000rpm 10min，去上清
3.离心管倒扣在吸水纸上，然后可以用移液枪小心把多余残留的酒精吸掉，在无菌操作台上吹干或者打开盖子在4℃冰 ...

请问用70%乙醇洗沉淀去上清是离心后直接倒掉的，还是吸走的呢？
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12楼2011-08-04 22:21:43
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hc1027

木虫 (正式写手)
引用回帖:
11楼: Originally posted by bear0329 at 2011-08-04 22:15:18:
1.加氯仿异戊醇时都要缓慢，颠倒混匀即可，13000rpm 10min
2.洗完沉淀后，13000rpm 10min，去上清
3.离心管倒扣在吸水纸上，然后可以用移液枪小心把多余残留的酒精吸掉，在无菌操作台上吹干或者打开盖子在4℃冰 ...

请问用70%乙醇洗沉淀去上清是离心后直接倒掉的，还是吸走的呢？
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13楼2011-08-04 22:21:53
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hc1027

木虫 (正式写手)
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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
11楼: Originally posted by bear0329 at 2011-08-04 22:15:18:
1.加氯仿异戊醇时都要缓慢，颠倒混匀即可，13000rpm 10min
2.洗完沉淀后，13000rpm 10min，去上清
3.离心管倒扣在吸水纸上，然后可以用移液枪小心把多余残留的酒精吸掉，在无菌操作台上吹干或者打开盖子在4℃冰 ...

那篇AEM的文献主要还是针对细菌的，对于真菌的话其实效果不是很好的吧。
里面也说道了，是不是需要液氮研磨呢？
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14楼2011-08-04 22:23:46
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