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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】土壤真菌PCR
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wuzunfeng416

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】土壤真菌PCR 已有6人参与

最近再批土壤真菌，没条带，望大家提提建议，用的引物是NS1F和NS8R
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1楼 2011-03-15 14:08:23
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hc1027

木虫 (正式写手)
★
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引用回帖:
11楼: Originally posted by bear0329 at 2011-08-04 22:15:18:
1.加氯仿异戊醇时都要缓慢，颠倒混匀即可，13000rpm 10min
2.洗完沉淀后，13000rpm 10min，去上清
3.离心管倒扣在吸水纸上，然后可以用移液枪小心把多余残留的酒精吸掉，在无菌操作台上吹干或者打开盖子在4℃冰 ...

请问用70%乙醇洗沉淀去上清是离心后直接倒掉的，还是吸走的呢？
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12楼2011-08-04 22:21:43
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allica

新虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
条带不好原因挺多的，首先检查你的基因组DNA质量。然后就是你的PCR模板量和PCR程序调整。可以做个退火温度梯度的实验。
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2楼2011-03-15 15:41:56
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精精

金虫 (小有名气)
★
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引用回帖:
Originally posted by wuzunfeng416 at 2011-03-15 14:08:23:
最近再批土壤真菌，没条带，望大家提提建议，用的引物是NS1F和NS8R

用这对引物扩真菌好像问题是挺多的，但是好像好是能够扩出来的，再尝试试试~~
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少才微善
3楼2011-03-17 16:49:24
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syw2005

铁杆木虫 (小有名气)
我用的ITS1和ITS4，第一次能扩出来，后来再也扩不出来，不知为何？试了好多条件都不行？难，我从模板、引物、酶都摸了，还是不行。不过有一些可以定下来，模板有抑制物。多试才有经验。
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新疆胡杨
4楼2011-08-01 22:10:48
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