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[交流]
【求助/交流】克隆-定量-测序，结果怪异
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大家好，我做荧光定量PCR,绝对定量，要制备质粒标准品，在做蓝白斑筛选的时候没有加IPTG和x-gal，我挑取单个白斑，提质粒，普通PCR，扩出目的条带，然后系列梯度稀释，做定量，绘制标准曲线，结果还挺好，可是等我测序结果回来时候，惊呆了，居然是质粒的序列，难道是我目的片段没有连接上？如果没有连接上，PCR后电泳怎么出现了目的条带，而且我同时做了四个目的片段的重组质粒，仅有一个测出来是跟我做的菌具有100%的相似性，其他的都不是。到底怎么回事，正准备重新做，但是为了避免悲剧再次重现，还是想请各位给我点指导意见，这次克隆时肯定会加 IPTG和x-gal避免假阳性。 在此先谢谢各位关注小女小贴！  |
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那你挑中的白斑菌落，不是目的菌落可能性很大，我建议还是重做吧，第一步奠基都没好，后面的估计很悬
8楼2011-03-07 09:00:45
2楼2011-03-04 15:57:03
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