| 查看: 1626 | 回复: 8 | |||
[交流]
【求助/交流】克隆-定量-测序，结果怪异
|
|
大家好，我做荧光定量PCR,绝对定量，要制备质粒标准品，在做蓝白斑筛选的时候没有加IPTG和x-gal，我挑取单个白斑，提质粒，普通PCR，扩出目的条带，然后系列梯度稀释，做定量，绘制标准曲线，结果还挺好，可是等我测序结果回来时候，惊呆了，居然是质粒的序列，难道是我目的片段没有连接上？如果没有连接上，PCR后电泳怎么出现了目的条带，而且我同时做了四个目的片段的重组质粒，仅有一个测出来是跟我做的菌具有100%的相似性，其他的都不是。到底怎么回事，正准备重新做，但是为了避免悲剧再次重现，还是想请各位给我点指导意见，这次克隆时肯定会加 IPTG和x-gal避免假阳性。 在此先谢谢各位关注小女小贴！  |
回复此楼» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有246人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 新基因的克隆和荧光定量表达比较好发的SCI杂志
已经有12人回复
- 请教一个关于测序结果的问题
已经有19人回复
- 测序结果怪异
已经有10人回复
- 克隆测序的问题
已经有3人回复
- pcr产物测序和克隆之后重组质粒测序结果一样吗？
已经有12人回复
- 测序结果的疑问
已经有7人回复
- 克隆基因连接到载体上测序发现有一个点突变怎么办？
已经有16人回复
- 【求助/交流】质粒测序测不到克隆位点
已经有16人回复
- 【求助/交流】克隆测序问题
已经有6人回复
- 【求助/交流】克隆测序无信号
已经有14人回复
2楼2011-03-04 15:57:03
3楼2011-03-04 16:07:17
4楼2011-03-04 16:13:36
5楼2011-03-04 22:26:30
6楼2011-03-06 23:18:59
7楼2011-03-07 08:48:54
那你挑中的白斑菌落，不是目的菌落可能性很大，我建议还是重做吧，第一步奠基都没好，后面的估计很悬
8楼2011-03-07 09:00:45
9楼2011-03-07 19:47:12
