| 查看: 4744 | 回复: 10 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[交流]
【求助/交流】做培养细胞的RT-PCR，β-actin内参出现两个条带，求原因。
|
|||
|
我进行培养细胞的RT-PCR，按试剂盒说明提取总RNA后，用一步法进行RT-PCR，用内参β-actin的引物进行，产物长度315bp，反应条件为：50摄氏度30min,94摄氏度2min，94摄氏度30s，59摄氏度30s,72摄氏度1min(上述三步进行30次），72摄氏度7分钟，然后用产物进行电泳，结果两个样本（是两瓶细胞中分别提取的总RNA)在紫外仪下均看到两个条带（见照片）。请问这是不是正常？ 另外我还有个问题请教：做RT-PCR是不是只要像这样条带出来就行了？如果要定量，是不是一个培养瓶里的细胞提出来的RNA只能算一个样本？比如我有两瓶细胞，一个做实验组加药，一个做对照组不加，两瓶细胞分别提取一份总RNA，然后各分成3份同时进行RT-PCR，最后获得6个电泳后的光度值（实验组3个，对照组3个），之后按实验组3个样本，对照组3个样本进行统计学分析。这样是不是可以？还是一定要实验组养3瓶细胞，对照组养3瓶细胞，每瓶提取1份总RNA？ 我第一次做RT-PCR，不太懂，谢谢帮助！   /*-------------------------------------以下为2月18日新增的---------------------*/ 又做了一次，从提总RNA开始，这次是正式实验，加了干预因素的，还分了时间段（上次只是走一遍整个过程）还是内参有两个条带，这次我是连目的基因一块儿做了，目的基因很好，但是内参还是有两个条带。这次我一共做了18个泳道，截图是其中4个，最左边是Marker，不太清楚，接着两条是目的基因，最右边是β-actin内参，还是有两个条带。我的问题是如果是DNA污染，应该是3个基因都有污染吧？我还有个问题：像这样的图片能定量吗？因为所有时间段的所有基因都有条带，也就是说没有空的，我问了实验室老师，实验室只能出这样的图片，出不了数据的。谢谢了。  [ Last edited by zwdnet on 2011-2-18 at 22:50 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有287人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- western blot 内参β-actin图片异常
已经有11人回复
- RT-PCR、western blot检测所需细胞数及细胞培养板的选择
已经有7人回复
- 求助~~~~~PCR产物条带分析
已经有15人回复
- RT—PCR引物、条带问题，新手求助，求意见，求建议！
已经有9人回复
- 如何做 Western blot 以及RT-PCR 的加药处理时间梯度？细胞数量如何统一？
已经有9人回复
- RT-PCR结果分析求助
已经有5人回复
- realtime PCR 内参问题
已经有3人回复
- DNA的Marker总跑不开是什么原因？
已经有17人回复
- 最近RT-PCR能够出来内参，却没有目的条带，请各位高手帮忙
已经有9人回复
- ACTB 内参P不出来
已经有6人回复
- RT-PCR跑出来的条带没有量效关系怎么办？什么原因
已经有3人回复
- overlap PCR做不出来呐。。。。
已经有23人回复
- ＲＴ－ＰＣＲ问题求助
已经有18人回复
- 【求助/交流】RT-PCR ，内参在哪个步骤添加以及marker何时使用及确定？谢谢
已经有14人回复
- 【求助/交流】目的基因PCR后电泳出现多条带
已经有7人回复
- 【讨论】细胞培养时出现浑浊
已经有7人回复
- 【求助/交流】qRT-PCR需要做不加RT的对照吗？
已经有3人回复
- 【求助/交流】PCR条带不清楚
已经有11人回复
» 抢金币啦！回帖就可以得到:
-
南京医科大学生殖医学与子代健康国重实验室-董飞宏课题组-学术硕士招生
+1/101
-
物理学 调剂
+1/92
-
专业技术开发及第三方检测
+1/87
-
何时使用 CODA™ 科里奥利质量流量仪表- 艾里卡特（Alicat）
+2/52
-
西北工业大学光子学研究团队诚聘博士后！
+2/44
-
上海交通大学电催化方向博后招聘-有锂电、高分子、燃料电池背景者优先
+1/35
-
生殖医学与子代健康全国重点实验室遗传学课题组招收研究生(长期有效)
+1/34
-
青岛大学泰山学者课题组招2026年申请考核制博士
+1/34
-
澳大利亚西澳大学（UWA）张金强课题组招收全奖博士生（化工新能源方向）
+1/32
-
招硕士调剂生
+2/28
-
华南师范大学（211）申请审核制博士招生- 电子、自动化、机械、生物学、物理相关专业
+1/25
-
海南师范大学孙元元老师招生博士，名额1~2个，2026年9月份入学（光电/光热催化方向）
+1/24
-
学术/专业硕士调剂——化学、资源与环境
+1/15
-
【实战型】【生物医药】2026青岛大学招博士生 含少数民族骨干计划2名！！！
+1/11
-
南京林业大学有机功能分子实验室博士生招生启事
+1/8
-
重庆大学药学院闫海龙课题组拟招收2026年申请考核制博士研究生数名
+1/7
-
福建师范大学 院士团队 招2026级博士1名
+1/5
-
重庆大学诚招2026年生物材料方向博士生
+1/4
-
北京大学环境学院张子帅研究员招收科研助理
+1/3
-
层流压差式流量测控产品在环保与分析仪器领域的应用与优势
+1/2
7楼2011-02-18 12:45:27
2楼2011-01-28 16:28:38
3楼2011-01-28 23:48:29
4楼2011-01-30 09:58:54
