| 查看: 5182 | 回复: 10 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[交流]
【求助/交流】做培养细胞的RT-PCR，β-actin内参出现两个条带，求原因。
|
|||
|
我进行培养细胞的RT-PCR，按试剂盒说明提取总RNA后，用一步法进行RT-PCR，用内参β-actin的引物进行，产物长度315bp，反应条件为：50摄氏度30min,94摄氏度2min，94摄氏度30s，59摄氏度30s,72摄氏度1min(上述三步进行30次），72摄氏度7分钟，然后用产物进行电泳，结果两个样本（是两瓶细胞中分别提取的总RNA)在紫外仪下均看到两个条带（见照片）。请问这是不是正常？ 另外我还有个问题请教：做RT-PCR是不是只要像这样条带出来就行了？如果要定量，是不是一个培养瓶里的细胞提出来的RNA只能算一个样本？比如我有两瓶细胞，一个做实验组加药，一个做对照组不加，两瓶细胞分别提取一份总RNA，然后各分成3份同时进行RT-PCR，最后获得6个电泳后的光度值（实验组3个，对照组3个），之后按实验组3个样本，对照组3个样本进行统计学分析。这样是不是可以？还是一定要实验组养3瓶细胞，对照组养3瓶细胞，每瓶提取1份总RNA？ 我第一次做RT-PCR，不太懂，谢谢帮助！   /*-------------------------------------以下为2月18日新增的---------------------*/ 又做了一次，从提总RNA开始，这次是正式实验，加了干预因素的，还分了时间段（上次只是走一遍整个过程）还是内参有两个条带，这次我是连目的基因一块儿做了，目的基因很好，但是内参还是有两个条带。这次我一共做了18个泳道，截图是其中4个，最左边是Marker，不太清楚，接着两条是目的基因，最右边是β-actin内参，还是有两个条带。我的问题是如果是DNA污染，应该是3个基因都有污染吧？我还有个问题：像这样的图片能定量吗？因为所有时间段的所有基因都有条带，也就是说没有空的，我问了实验室老师，实验室只能出这样的图片，出不了数据的。谢谢了。  [ Last edited by zwdnet on 2011-2-18 at 22:50 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有102人回复
-
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- western blot 内参β-actin图片异常
已经有11人回复
- RT-PCR、western blot检测所需细胞数及细胞培养板的选择
已经有7人回复
- 求助~~~~~PCR产物条带分析
已经有15人回复
- RT—PCR引物、条带问题，新手求助，求意见，求建议！
已经有9人回复
- 如何做 Western blot 以及RT-PCR 的加药处理时间梯度？细胞数量如何统一？
已经有9人回复
- RT-PCR结果分析求助
已经有5人回复
- realtime PCR 内参问题
已经有3人回复
- DNA的Marker总跑不开是什么原因？
已经有17人回复
- 最近RT-PCR能够出来内参，却没有目的条带，请各位高手帮忙
已经有9人回复
- ACTB 内参P不出来
已经有6人回复
- RT-PCR跑出来的条带没有量效关系怎么办？什么原因
已经有3人回复
- overlap PCR做不出来呐。。。。
已经有23人回复
- ＲＴ－ＰＣＲ问题求助
已经有18人回复
- 【求助/交流】RT-PCR ，内参在哪个步骤添加以及marker何时使用及确定？谢谢
已经有14人回复
- 【求助/交流】目的基因PCR后电泳出现多条带
已经有7人回复
- 【讨论】细胞培养时出现浑浊
已经有7人回复
- 【求助/交流】qRT-PCR需要做不加RT的对照吗？
已经有3人回复
- 【求助/交流】PCR条带不清楚
已经有11人回复
» 抢金币啦！回帖就可以得到:
-
诚征女友
+1/261
-
浙江理工大学能源催化团队诚聘专职教师/博士后
+2/210
-
★★★中山大学（深圳）院士团队招收27届推免硕士生（低维材料与器件方向）
+1/79
-
华东理工大学 生物工程学院 生物反应器工程国家重点室 博士后招聘
+1/78
-
坐标南京
+1/30
-
招收博士后（神经退行性疾病、认知障碍疾病）
+1/27
-
深圳大学 招收2027级推免研究生 (金属材料/ 3D打印/ 氢能等方向)
+1/25
-
西湖大学物理学、光学、电子信息方向博士生招生（长期有效）
+5/25
-
诚征女友( 西安 )
+1/22
-
一株吊兰
+1/12
-
招生宣讲会倒计时！7月29日20：00，不见不散！
+1/10
-
四川大学周加境课题组招博士研究生/研究助理（自组装材料/生物医学方向）
+1/6
-
新西兰坎特伯雷大学招博士后
+1/6
-
西安交通大学补亚忠课题组招收申请考核制博士生
+2/6
-
国家自然科学基金申报者发榜前心理状态调查，麻烦帮忙填一下哇！
+1/6
-
西湖大学物理学、光学、电子信息方向博士生招生（长期有效）
+5/5
-
宁波诺丁汉大学新能源与环境材料技术研究中心招收2027年春季入学博士生
+1/3
-
这些Scopus收录的英文国际期刊正在征稿（快速审稿）2026年底前免APC！
+1/3
-
大家有research gate的账号吗？有偿借用
+1/2
-
浙江大学王宇课题组诚聘博士后/博士研究生/科研助理（招聘长期有效）
+1/2
5楼2011-01-30 11:05:15
2楼2011-01-28 16:28:38
3楼2011-01-28 23:48:29
4楼2011-01-30 09:58:54