| 查看: 5488 | 回复: 10 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
zwdnet铁虫 (初入文坛)
|
[交流]
【求助/交流】做培养细胞的RT-PCR，β-actin内参出现两个条带，求原因。
|
||
|
我进行培养细胞的RT-PCR，按试剂盒说明提取总RNA后，用一步法进行RT-PCR，用内参β-actin的引物进行，产物长度315bp，反应条件为：50摄氏度30min,94摄氏度2min，94摄氏度30s，59摄氏度30s,72摄氏度1min(上述三步进行30次），72摄氏度7分钟，然后用产物进行电泳，结果两个样本（是两瓶细胞中分别提取的总RNA)在紫外仪下均看到两个条带（见照片）。请问这是不是正常？ 另外我还有个问题请教：做RT-PCR是不是只要像这样条带出来就行了？如果要定量，是不是一个培养瓶里的细胞提出来的RNA只能算一个样本？比如我有两瓶细胞，一个做实验组加药，一个做对照组不加，两瓶细胞分别提取一份总RNA，然后各分成3份同时进行RT-PCR，最后获得6个电泳后的光度值（实验组3个，对照组3个），之后按实验组3个样本，对照组3个样本进行统计学分析。这样是不是可以？还是一定要实验组养3瓶细胞，对照组养3瓶细胞，每瓶提取1份总RNA？ 我第一次做RT-PCR，不太懂，谢谢帮助！   /*-------------------------------------以下为2月18日新增的---------------------*/ 又做了一次，从提总RNA开始，这次是正式实验，加了干预因素的，还分了时间段（上次只是走一遍整个过程）还是内参有两个条带，这次我是连目的基因一块儿做了，目的基因很好，但是内参还是有两个条带。这次我一共做了18个泳道，截图是其中4个，最左边是Marker，不太清楚，接着两条是目的基因，最右边是β-actin内参，还是有两个条带。我的问题是如果是DNA污染，应该是3个基因都有污染吧？我还有个问题：像这样的图片能定量吗？因为所有时间段的所有基因都有条带，也就是说没有空的，我问了实验室老师，实验室只能出这样的图片，出不了数据的。谢谢了。  [ Last edited by zwdnet on 2011-2-18 at 22:50 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
恩诺沙星（Enrofloxacin）科研解析：分子特征、LC-MS/MS 检测与实验室使用要点
已经有0人回复
-
Calderasib理化性质与实验操作技术笔记
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有59人回复
-
RMC-6291怎么用？RAS(ON) 三重复合物工具化合物的实验室实操要点
已经有0人回复
-
苯并呋咱全解析：NBD 荧光衍生化试剂母核的化学特性与实验室应用
已经有0人回复
-
生物质炭与活化剂氢氧化钾混合注意事项
已经有0人回复
-
科研人必读：新一代 KRAS G12C 抑制剂 Olomorasib 的研究进展
已经有0人回复
-
BT-11（Omilancor）研究化合物全解析：从分子结构到实验应用要点
已经有0人回复
-
富马酸贝达喹啉：二芳基喹啉类工具化合物的化学特征
已经有0人回复
-
BT投稿with editor状态快两周了，正常吗
已经有25人回复
-
Silevertinib（BDTX-1535）结构拆解：炔基双环片段为何成为合成瓶颈
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- western blot 内参β-actin图片异常
已经有11人回复
- RT-PCR、western blot检测所需细胞数及细胞培养板的选择
已经有7人回复
- 求助~~~~~PCR产物条带分析
已经有15人回复
- RT—PCR引物、条带问题，新手求助，求意见，求建议！
已经有9人回复
- 如何做 Western blot 以及RT-PCR 的加药处理时间梯度？细胞数量如何统一？
已经有9人回复
- RT-PCR结果分析求助
已经有5人回复
- realtime PCR 内参问题
已经有3人回复
- DNA的Marker总跑不开是什么原因？
已经有17人回复
- 最近RT-PCR能够出来内参，却没有目的条带，请各位高手帮忙
已经有9人回复
- ACTB 内参P不出来
已经有6人回复
- RT-PCR跑出来的条带没有量效关系怎么办？什么原因
已经有3人回复
- overlap PCR做不出来呐。。。。
已经有23人回复
- ＲＴ－ＰＣＲ问题求助
已经有18人回复
- 【求助/交流】RT-PCR ，内参在哪个步骤添加以及marker何时使用及确定？谢谢
已经有14人回复
- 【求助/交流】目的基因PCR后电泳出现多条带
已经有7人回复
- 【讨论】细胞培养时出现浑浊
已经有7人回复
- 【求助/交流】qRT-PCR需要做不加RT的对照吗？
已经有3人回复
- 【求助/交流】PCR条带不清楚
已经有11人回复
zwdnet
铁虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 182.7
- 散金: 1
- 帖子: 43
- 在线: 13.7小时
- 虫号: 613793
- 注册: 2008-09-27
- 专业: 牙体牙髓及根尖周组织疾病
10楼2011-02-19 16:07:21
2楼2011-01-28 16:28:38
zwdnet
铁虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 182.7
- 散金: 1
- 帖子: 43
- 在线: 13.7小时
- 虫号: 613793
- 注册: 2008-09-27
- 专业: 牙体牙髓及根尖周组织疾病
3楼2011-01-28 23:48:29
三磷酸腺苷
铁杆木虫 (职业作家)
- MolEPI: 7
- 应助: 1 (幼儿园)
- 贵宾: 0.021
- 金币: 7298.5
- 散金: 9
- 红花: 13
- 帖子: 4032
- 在线: 224.7小时
- 虫号: 551611
- 注册: 2008-04-27
- 性别: GG
- 专业: 神经系统肿瘤（含特殊感受
4楼2011-01-30 09:58:54
20