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zhangfei7706

木虫 (小有名气)

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[交流] 【求助/交流】PCR产物测序总是不对

最近一直在设计豚鼠的HMGCoA R基因，因为NCBI上没有公布序列，就找了其它几个物种的序列，比对后找到相似度高的序列作为保守区设计引物，结果1，无条带；2，有非特异性条带；3，目的条带有但送去测序发现不是该基因。目前一点进展都没有。请问1.保守区怎么确定？2.目的条带一般应多大？3.T载体连接测序的方法。恳请指点

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1楼 2011-01-10 14:51:32

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amilie030312

金虫 (正式写手)

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zhangfei7706(金币+2): 2011-01-18 16:45:20

1、用软件来进行序列对比，随便什么软件都可以确定保守序列，当然你输入的近似物种序列越多那么得到的同源序列位置越准确。我个人比较喜欢用BioEdit，其他的DNAMAN、DNAStar等等都可以。
2、目的条带有多大这个问题我没理解诶，是否是我没看明白呢，因为你自己试验的目的条带有多大只有你自己知道啊，不了解你试验的人怎么会知道。找近似物种的序列，看同一个基因在其他近似物种中是多大的就差不多了啊，就算有差别也不会差别太大的。
3、第三个问题可以去看分子克隆，把它当一本圣经来看吧。你90%的问题就都解决了。